LncRNA MEG3调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

作     者：马翠 龚蜇强 高玉章 温秀梅 MA Cui;GONG Zheqiang;GAO Yuzhang;WEN Xiumei

作者机构：杭州市余杭区第一人民医院内分泌科311199 杭州市余杭区第一人民医院消化内科311199 

出 版 物：《浙江医学》 (Zhejiang Medical Journal)

年 卷 期：2024年第46卷第16期

页      面：1719-1724页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：杭州市医药卫生科技计划项目(B20220042) 浙江省医学会临床医学科研专项资金项目(2022ZYC-A146) 浙江省中医药科技计划项目(2023ZL612) 

主　　题：糖尿病肾病 小鼠肾足细胞 长链非编码RNA母系表达基因3 结节性硬化症复合体1 自噬 

摘      要：目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制。方法采用葡萄糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)构建足细胞损伤模型。将细胞分为高糖组、高糖+短发夹RNA的阴性对照(sh-NC)组、高糖+干扰LncRNA MEG3表达的短发夹RNA(sh-LncRNA MEG3)组、高糖+sh-LncRNA MEG3+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、高糖+sh-LncRNA MEG3+干扰结节性硬化症复合体1表达的短发夹RNA(sh-TSC1)组和对照组。采用四甲基偶氮唑盐法检测MPC5活性,采用流式细胞术检测MPC5凋亡率,采用实时荧光定量PCR检测LncRNA MEG3相对表达水平,采用Western blot检测自噬相关蛋白[重组人自噬效应蛋白(Beclin-1)、结节性硬化症复合体1(TSC1)、选择性自噬接头蛋白(p62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)]表达,采用荧光原位杂交技术检测LncRNA MEG3的表达定位。结果高糖组MPC5活性低于对照组,高糖+sh-NC组MPC5活性低于高糖+sh-LncRNA MEG3组,高糖+sh-LncRNA MEG3+sh-TSC1组、高糖+sh-LncRNA MEG3+3-MA组MPC5活性低于高糖+sh-LncRNA MEG3组(均P0.01)。高糖组MPC5凋亡率高于对照组,高糖+sh-NC组MPC5凋亡率高于高糖+sh-LncRNA MEG3组,高糖+sh-LncRNA MEG3+sh-TSC1组、高糖+sh-LncRNA MEG3+3-MA组MPC5凋亡率高于高糖+sh-LncRNA MEG3组(均P0.01)。高糖组MPC5的LncRNA MEG3相对表达水平高于对照组,高糖+sh-NC组MPC5的LncRNA MEG3相对表达水平高于高糖+sh-LncRNA MEG3组,差异均有统计学意义(均P0.01)。高糖组LC3、Beclin-1、TSC1蛋白表达低于对照组,p62蛋白表达高于对照组,高糖+sh-LncRNA MEG3组LC3、Beclin-1、TSC1蛋白表达高于高糖+sh-NC组,p62蛋白表达低于高糖+sh-NC组,高糖+sh-LncRNA MEG3+sh-TSC1组TSC1蛋白表达低于高糖+sh-LncRNA MEG3组,高糖+sh-LncRNA MEG3+3-MA组、高糖+sh-LncRNA MEG3+sh-TSC1组的LC3、Beclin-1蛋白表达低于高糖+sh-LncRNA MEG3组,p62蛋白表达高于高糖+sh-LncRNA MEG3组,差异均有统计学意义(均P0.01)。高糖+sh-LncRNA MEG3组TSC1蛋白表达高于高糖+sh-NC组,差异有统计学意义(P0.01)。LncRNA MEG3在细胞核和细胞质中均可表达。结论LncRNA MEG3可通过靶向TSC1介导MPC5自噬,进而减轻糖尿病肾病足细胞损伤程度。