基于UPLC-Q-TOF-MS探究加减青娥方抗皮肤光老化及调控昼夜节律的作用机制
作者机构：天津中医药大学 天津市中医药研究院附属医院 天津市中药智能制药与绿色制药重点实验室 现代中医药海河实验室
出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)
年 卷 期：2024年
核心收录：
学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金项目(81602773,81803862) 中国工程院项目(2023-XBZD-11-01)
主 题：加减青娥方 皮肤光老化 昼夜节律 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS) 网络药理学
摘 要：目的：采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）、网络药理学和实验验证探究加减青娥方（MQEF）抗皮肤光老化的药效物质和作用机制。方法：利用UPLC-Q-TOF-MS技术及文献检索分析小鼠外用MQEF后的经皮吸收成分；通过数据库获得MQEF治疗皮肤光老化的潜在靶点；构建化合物-潜在靶点网络图和蛋白-蛋白互作网络图，筛选关键成分和核心靶点；使用中波紫外线（UVB）照射HaCaT细胞建立光老化细胞模型，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法测定补骨脂酚（BAK）、丹酚酸B（SAB）对HaCaT细胞的安全剂量和UVB照射后BAK、SAB对细胞活力的影响；通过活性氧（ROS）荧光探针检测BAK、SAB对ROS生成的影响；使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Real-time PCR）法测定氧化应激、炎症、胶原代谢相关基因和昼夜节律时钟基因的表达水平。结果：经分析确定24个MQEF经皮吸收成分；将MQEF经皮吸收成分的367个靶点与417个疾病相关靶点取交集，既得47个MQEF治疗皮肤光老化的潜在靶点；MQEF通过BAK、SAB等关键成分，作用于丝氨酸/苏氨酸激酶1（Akt1）、丝裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）等核心靶点，干预肿瘤坏死因子（TNF）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路等核心通路发挥治疗皮肤光老化作用；相比模型组，给药BAK、SAB均可显著提升HaCaT细胞存活率（P0.01）；相比模型组，给药BAK、SAB可显著抑制光老化HaCaT细胞中环氧合酶-2（COX-2）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的mRNA表达（P0.01），显著提升血红素加氧酶-1（HO-1）和醌氧化还原酶-1（NQO-1）的mRNA表达（P0.05，P0.01），清除UVB诱导的过量ROS，并且可上调昼夜节律时钟基因脑和肌肉芳香烃受体核转位样蛋白1（BMAL1）和昼夜自发输出周期蛋白kaput（CLOCK）的mRNA表达（P0.05，P0.01）。结论：MQEF通过多种成分、多重靶点及多条途径的协同作用治疗皮肤光老化；MQEF中的关键成分BAK和SAB具有抗皮肤光老化作用，其作用机制包括抑制氧化应激、阻止胶原蛋白降解、减少炎症反应，以及通过调控时钟基因表达以维持正常的皮肤昼夜节律。
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