靶向性CPI-444载药纳米微粒的制备及其对T细胞活性和抗肿瘤效应的影响

作     者：陈明水 李洁羽 王玲 周智锋 张麟腾 CHEN Mingshui;LI Jieyu;WANG Ling;ZHOU Zhifeng;ZHANG Linteng

作者机构：福建医科大学肿瘤临床医学院福建省肿瘤医院福建福州350014 

出 版 物：《中国肿瘤生物治疗杂志》 (Chinese Journal of Cancer Biotherapy)

年 卷 期：2024年第31卷第8期

页      面：777-785页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：福建省医学创新课题(No.2020CXA012) 福建省自然基金联合资金(No.2023J011272) 福建省肿瘤医院院内基金(No.2023YN10) 

主　　题：纳米微粒 腺苷受体A2A 过继细胞疗法 

摘      要：目的:制备并表征包载CPI-444并偶联CD8抗体的纳米微粒(CNP/αCD8),探讨其对CD8^(+)T细胞活化、增殖和抗肿瘤作用的影响。方法:采用复乳溶剂蒸发法和EDC/NHS法制备包载腺苷受体A2A(A2AR)特异性拮抗剂CPI-444(C)或香豆素6(C6)荧光素的纳米微粒并分别在其表面偶联CD8抗体,制得CNP/αCD8和C6NP/αCD8。扫描电镜和NanoPlus粒度测定仪表征纳米微粒形态和粒径,液相色谱与串联质谱联用(LC-MS/MS)法和离心法测定纳米微粒的载药量和药物释放情况,荧光显微镜和流式细胞仪检测CD8^(+)T细胞内化C6NP/αCD8的情况,流式细胞仪、ELISA和LDH法检测CNP/αCD8对CD8^(+)T细胞增殖、活化、细胞毒活性和杀瘤能力的影响。结果:CNP/αCD8纳米微粒为圆形、粒径约150 nm,能有效包载CPI-444和偶联CD8抗体,药物包封率和CD8抗体偶联效率分别约为60%和53.4%;CNP/αCD8纳米微粒具有良好稳定性,能被CD8+T细胞内化,抑制A2AR分子表达。生物学功能实验显示,CNP/αCD8增强CD8^(+)T细胞的增殖能力、促进T细胞活化、分泌细胞因子及产生颗粒酶B和穿孔素,并增强CD8^(+)T细胞杀伤肿瘤细胞的能力。结论:CNP/αCD8纳米微粒能显著增强CD8^(+)T细胞免疫效应功能,其增强CD8^(+)T细胞功能可能是通过抑制A2AR分子的表达起作用。