基于MIRA-CRISPR/Cas12a技术的苏黎世克罗诺杆菌快速检测方法建立

作     者：杨亚玲 赵欣 亓梦 李晓燕 郭峻 

作者机构：省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学食品科学与工程学院 中国检验检疫科学研究院 天津市疾病预防控制中心微生物检验检测所天津市疾病预防控制中心天津市传染病病原微生物重点实验室 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2024年

学科分类：09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2023YFC2605100) 

主　　题：苏黎世克罗诺杆菌 CRISPR/Cas12a 胶体金侧向流层析 快速检测 

摘      要：该研究针对婴幼儿配方奶粉中重点监测的致病性苏黎世克罗诺杆菌，利用多酶恒温快速扩增技术（Multienzyme Isothermal Rapid Amplification,MIRA）和CRISPR/Cas12a检测系统，开发了一种快速检测体系。基于苏黎世克罗诺杆菌的CTU＿22970基因序列，设计了特异性MIRA引物和CrR NA，通过MIRA技术扩增得到靶标DNA，靶标DNA的存在可以激活CrR NA-Cas12a复合物的反式切割活性，最后通过胶体金侧向流层析试纸条技术实现检测信号的读出。该研究所构建的检测体系具有良好的特异性与灵敏度，经验证，克罗诺杆菌属内不同菌种与非克罗诺杆菌株的存在均不会激活Cas12a的反式切割功能。该体系可在1.5 h内完成检测，对纯培养物的检出限为1 CFU/mL，对实际样品的检测，初始含菌量为105 CFU/g的奶粉样品不增菌即可检出，初始含菌量为104、103、102、101、100 CFU/g的奶粉样品分别需要预孵育2、4、6、8、10 h检出。检测过程操作简单，不依赖大型仪器设备，无需专业培训，适用于现场化的检测应用，对食品中苏黎世克罗诺杆菌的控制具有重要的实际意义。