基于Toll样受体/髓系分化初级反应蛋白质88信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎的作用机制

作     者：顾富城 杨美鑫 林惠红 吴伟欣 耿秋东 王和鸣 李楠 GU Fucheng;YANG Meixin;LIN Huihong;WU Weixin;GENG Qiudong;WANG Heming;LI Nan

作者机构：福建中医药大学中医学院福建福州350122 福建省漳州市中医院福建漳州363000 中医骨伤及运动康复教育部重点实验室福建福州350122 福建中医药大学附属人民医院福建福州350122 

出 版 物：《中医正骨》 (The Journal of Traditional Chinese Orthopedics and Traumatology)

年 卷 期：2024年第36卷第8期

页      面：9-18页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：福建省卫生健康科技计划项目(2021QNA068) 

主　　题：关节炎 痛风性 四妙汤 土茯苓 类Toll受体 髓系分化因子88 

摘      要：目的:基于Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/髓系分化初级反应蛋白质88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)的作用机制。方法:将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,每组8只。模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组大鼠以高尿酸造模法结合尿酸盐注射法在右侧踝关节进行AGA造模,空白组以生理盐水灌胃,并在右侧踝关节注射生理盐水。AGA造模结束后,观察大鼠右侧踝关节,评估炎症指数,并计算踝关节肿胀指数。AGA造模结束后24 h,中药低、中、高剂量组大鼠均以四妙散加土茯苓方药液灌胃(生药用量分别为5 g·kg^(-1)、10 g·kg^(-1)、20 g·kg^(-1)),秋水仙碱组以秋水仙碱混悬液灌胃,空白组和模型组大鼠均以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃7 d。药物干预结束后24 h,腹主动脉取血,测定血清尿素氮和肌酐含量;取右侧踝关节滑膜组织,以实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TLR/MyD88信号通路相关基因TLR2、TLR4、MyD88、核因子κB抑制剂激酶α(nuclear factor-κB inhibitor kinase-α,IKK-α)、核因子κB抑制剂α(nuclear factor-κB inhibitor-α,IκB-α)mRNA表达水平,以蛋白质印迹技术检测IKK-α、IκB-α蛋白表达水平,采用免疫组化技术观察TLR2、TLR4蛋白表达情况及巨噬细胞聚集情况。结果:(1)模型验证结果。除空白组外,其余5组大鼠右侧踝关节注射尿酸盐混悬液后均逐渐发生肿胀,24 h后炎症指数均达到2级以上。造模后4 h、8 h、12 h、24 h,模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组的踝关节肿胀指数均高于空白组(造模后4 h:P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.004,P=0.031;造模后8 h:P=0.001,P=0.000,P=0.002,P=0.007,P=0.002;造模后12 h:P=0.000,P=0.000,P=0.004,P=0.010,P=0.006;造模后24 h:P=0.004,P=0.000,P=0.003,P=0.001,P=0.006)。(2)血清尿素氮和肌酐含量检测结果。6组大鼠血清尿素氮、肌酐含量总体比较,组间差异均无统计学意义。(3)踝关节滑膜组织中TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA水平检测结果。6组大鼠踝关节滑膜组织中MyD88 mRNA水平比较,差异无统计学意义。模型组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-αmRNA水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.020)。秋水仙碱组和中药中剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-αmRNA水平均低于模型组(TLR2:P=0.000,P=0.005;TLR4:P=0.018,P=0.000;IKK-α:P=0.003,P=0.004;IκB-α:P=0.008,P=0.010);中药低剂量组的TLR2、IκB-αmRNA水平均低于模型组(P=0.000,P=0.020),2组TLR4、IKK-αmRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.564,P=0.884);中药高剂量组的TLR4 mRNA水平低于模型组(P=0.024),2组TLR2、IKK-α、IκB-αmRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.349,P=0.320,P=0.579)。中药低、中剂量组与秋水仙碱组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-αmRNA水平比较,组间差异均无统计学意义(TLR2:P=0.836,P=0.056;TLR4:P=0.669,P=0.069;IKK-α:P=0.387,P=0.989;IκB-α:P=0.721,P=0.518);中药高剂量组的TLR2、TLR4 mRNA水平均高于秋水仙碱组(P=0.000,P=0.002),2组IKK-α、IκB-αmRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.313,P=0.136)。中药低、高剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-αmRNA水平均高于中药中剂量组(TLR2:P=0.000,P=0.047;TLR4:P=0.000,P=0.001;IKK-α:P=0.006,P=0.042;IκB-α:P=0.021,P=0.037);中药低剂量组的TLR2、TLR4 mRNA水平均低于中药高剂量组(P=0.001,P=0.006),2组IKK-α、IκB-αmR