ITGA6基因对非小细胞肺癌脑转移瘤细胞的影响

作     者：孙晓阳 顾强 姚佳浩 陈东霞 梁鹏 Sun Xiaoyang;Gu Qiang;Yao Jiahao;Chen Dongxia;Liang Peng

作者机构：哈尔滨医科大学附属肿瘤医院神经外科黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第四医院神经外科黑龙江哈尔滨150001 

出 版 物：《中国微侵袭神经外科杂志》 (Chinese Journal of Minimally Invasive Neurosurgery)

年 卷 期：2024年第28卷第8期

页      面：485-493页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：脑肿瘤 肿瘤转移 肺癌,非小细胞 整合素α6 

摘      要：目的深入探究ITGA6基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脑转移瘤细胞增殖、细胞周期调控、侵袭及迁移过程中的具体作用机制。方法通过挖掘GEO数据库中的NSCLC脑转移瘤相关数据,本研究成功识别出ITGA6基因为与NSCLC脑转移瘤发生和发展相关的重要因子。在此基础上,进一步探究该基因表达水平与NSCLC脑转移瘤患者预后之间的关联性。为验证ITGA6在NSCLC脑转移瘤中的表达模式,本研究进一步采用实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western Blot实验技术,在NSCLC脑转移瘤细胞系测定ITGA6表达水平。利用基因转染技术,在体外NSCLC脑转移瘤细胞系H1915-BrM和A549-BrM中分别转染阴性对照(NC组)和ITGA6特异性沉默载体(si-ITGA6组)。通过CCK-8增殖实验评估细胞增殖能力;利用EDU实验进一步验证细胞增殖变化;应用流式细胞技术检测细胞周期分布情况;通过Transwell侵袭实验和划痕愈合实验分析细胞侵袭和迁移能力。利用Western Blot技术检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平。结果利用GEO数据库系统分析NSCLC脑转移瘤的差异表达基因,并发现ITGA6是其中一个关键的上调基因。临床数据分析表明:ITGA6高表达与NSCLC脑转移瘤患者不良预后显著相关(P0.05)。进一步通过qRT-PCR和Western Blot技术在实验层面验证ITGA6在肺癌脑转移瘤细胞系中高表达。CCK-8和EDU实验结果表明:si-ITGA6显著抑制NSCLC脑转移瘤细胞H1915-BrM和A549-BrM的增殖(P0.05)。流式细胞技术揭示:si-ITGA6处理后,细胞在G0/G1期比例增加,并且S期及G2期细胞随之减少,表明细胞周期被阻滞(P0.05)。Transwell和划痕实验均显示,si-ITGA6显著降低NSCLC脑转移瘤细胞侵袭和迁移能力。Western Blot观察分析:si-ITGA6组中上皮标记物E钙黏蛋白表达显著上升,而间质标记物纤连蛋白、波形蛋白以及基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)表达则显著下降,提示EMT过程受到抑制。结论通过特异性沉默ITGA6基因,能够显著抑制NSCLC脑转移瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,同时阻滞细胞周期,并调控EMT相关蛋白的表达。