抑肝散治疗阿尔茨海默病的作用及机制探讨

作     者：张然 焦扬 邹爱英 李睿 张秋阳 商倩 ZHANG Ran;JIAO Yang;ZOU Aiying;LI Rui;ZHANG Qiuyang;Shang Qian

作者机构：天津医学高等专科学校药学与生物技术学院天津300222 天津中医药大学第一附属医院药学部国家中医针灸临床医学研究中心天津300193 天津中医药大学第二附属医院药学部天津300250 天津大学化工学院天津300073 天津市海河医院基础医学实验部天津300350 天津药物研究院有限公司天津市新药设计与发现重点实验室天津300462 

出 版 物：《药物评价研究》 (Drug Evaluation Research)

年 卷 期：2024年第47卷第8期

页      面：1749-1759页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：天津市中医药重点领域科研项目(2022008) 

主　　题：抑肝散 阿尔茨海默病 网络药理学 氧化损伤 炎症因子 

摘      要：目的探究抑肝散对阿尔茨海默病(AD)的治疗作用,通过网络药理学方法预测其机制,并进行实验验证。方法以D-半乳糖诱导AD小鼠模型,通过水迷宫和八臂迷宫实验考察抑肝散(400、800 mg·kg^(-1))对AD小鼠学习记忆功能的影响,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分析AD小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达变化。通过中药系统药理学数据分析平台(TCMSP)对抑肝散的组方药材柴胡、甘草、川芎、当归、白术、茯苓和钩藤进行活性成分筛选,采用GeneCards等数据库获取AD疾病靶点,筛选其核心靶点,并对核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,分别获取核心靶点涉及的生物过程(BP)、分子功能(MF)和细胞组分(CC)以及KEGG信号通路。小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞和RAW264.7巨噬细胞分别与H_(2)O_(2)和抑肝散(3、6μg·mL^(-1))共培养,观察抑肝散对Neuro-2a细胞体外增殖和凋亡的影响,及对Neuro-2a细胞Caspase-3和Caspase-8活性、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和线粒体膜电位(MMP)的影响;观察抑肝散对RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β、IL-2、IL-6表达的影响,对网络药理学结果进行验证。结果抑肝散可缓解AD小鼠学习记忆功能损伤,通过网络药理学技术筛选得到抑肝散治疗AD的活性成分159个,度值前10位的化合物分别是槲皮素、山柰酚、异鼠李素、β-谷甾醇、豆甾醇、7-甲氧基异黄酮、芒柄花素、柚皮素、美迪紫檀素和甘草查尔酮A,筛选得到核心靶点227个,度值排名前10的核心靶点为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL6)、肿瘤蛋白P53(TP53)、白细胞介素1β(IL1B)、雌激素受体1(ESR1)、原癌基因(JUN)、前列腺素氧化环化酶2(PTGS2)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)。生物信息学分析发现抑肝散治疗AD与糖基化终末产物/糖基化终末产物受体和脂质和动脉粥样硬化等信号通路有关。动物实验结果显示,抑肝散可改善AD模型小鼠学习记忆功能损伤,下调AD小鼠脑组织中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-αmRNA表达;细胞实验结果显示,抑肝散显著缓解H_(2)O_(2)对Neuro-2a细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用(P0.05),降低Caspase-3、Caspase-8活性(P0.05),降低细胞MDA和ROS水平(P0.05),升高MMP及GSH水平;抑肝散对H_(2)O_(2)诱导的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β、IL-2、IL-6升高具有显著抑制作用(P0.05)。结论抑肝散通过缓解学习记忆功能损伤和氧化损伤发挥治疗AD作用。