血小板源性生长因子B基因转染抑制缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡

作     者：陈邦党 陈小翠 马依彤 杨毅宁 马翔 刘芬 Chen Bang-dang;Chen Xiao-cui;Ma Yi-tong;Yang Yi-ning;Ma Xiang;Liu Fen

作者机构：新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院新疆心血管病研究重点实验室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院心脏中心新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2014年第18卷第38期

页      面：6090-6098页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：新疆维吾尔自治区自然科学基金(2011211B34) 国家自然科学基金(81160026) 新疆医科大学第一附属医院青年基金(2011QN04)~~ 

主　　题：组织工程 腺病毒科 病毒 缺氧 细胞凋亡 组织构建 血小板源性生长因子B 9型腺相关病毒 基因转染 心肌细胞 缺血缺氧 转染效率 血管新生 BAX Caspase-3 国家自然科学基金 

摘      要：背景:血小板源性生长因子B(platelet-derived growth factor-B,PDGF-B)是一种有效的促血管生长因子,9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype,rAAV9)对心肌细胞具有良好的靶向亲和力,是目前缺血性心脏疾病基因治疗的理想载体。目的:探索rAAV9介导PDGF-B基因(rAAV9-PDGF-B)体外转染乳鼠心肌细胞,抵抗缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。方法:分离培养原代乳鼠心肌细胞,分别将感染复数为1×105,1×106及1×107 MOI携带rAAV9-PDGF-B基因的重组9型腺相关病毒及空病毒(rAAV9-eGFP)转染乳鼠心肌细胞,逐日在荧光显微镜下观察eGFP的阳性表达,采用流式细胞仪测定rAAV9载体的转染效率,Western blot和免疫荧光鉴定PDGF-B蛋白表达情况;并于rAAV9-eGFP及rAAV9-PDGF-B(107感染复数)转染第5天时,建立体外心肌细胞缺血缺氧损伤模型,通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡数目,Western Blot检测Bax及Caspase-3凋亡相关蛋白的表达,研究PDGF-B基因过表达抗心肌细胞凋亡的作用及可能机制。结果与结论:rAAV9载体可有效转染乳鼠心肌细胞,eGFP和PDGF-B蛋白可在心肌细胞中高效正确表达,其表达强度随着转染时间和转染复数的增加而逐渐增强,第5天趋于稳定,此时各组转染率相比差异均有显著性意义(P0.01)。rAAV9-PDGF-B组心肌细胞凋亡率低于rAAV9-eGFP组(P0.05),且rAAV9-PDGF-B组凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3的表达与rAAV9-eGFP组比均显著下调(P0.05)。结果表明,PDGF-B基因过表达可有效减轻缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,其机制通过抑制Bax和Caspase-3蛋白表达而发挥作用,为rAAV9-PDGF-B载体用于缺血性心脏疾病的基因治疗提供依据。