用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株

作     者：吴亮 薛兰兰 王晓 吴腊梅 姜旭淦 陈盛霞 WU Liang;XUE Lan-lan;WANG Xiao;WU La-mei;JIANG Xu-gan;CHEN Sheng-xia

作者机构：江苏大学基础医学与医学技术学院镇江212013 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2014年第32卷第4期

页      面：264-267页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学青年基金(No.81301453) 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(No.WSBKTKT201302) 江苏大学高级人才启动基金(No.13JDG023 13JDG127) 江苏省研究生创新计划(No.CX10B_282Z)~~ 

主　　题：刚地弓形虫 脂肪酸代谢酶 四环素诱导调控表达系统 缺陷株 

摘      要：目的构建基于四环素诱导调控表达系统的刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)缺陷株。方法从弓形虫基因组中扩增fabz基因并构建四环素调控诱导表达载体pTetO7-Sag1-FABZ-Ty-DHFR,电穿孔法导入弓形虫TATi株,通过乙胺嘧啶抗性和极限稀释法筛选FABZ缺陷株,蛋白质印迹(Western blotting)检测虫体内附加表位标签Ty的表达。在5×105个FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素(终浓度为1μg/ml),Western blotting检测带有Ty标签的FABZ表达情况。结果筛选获得的缺陷株可表达带有Ty标签的转运肽型FABZ和成熟型FABZ。FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素24 h和48 h后,转运肽型FABZ表达量均较对照组显著降低(P0.05)。结论构建了由脱水四环素调控表达的弓形虫FABZ缺陷株。