显微剥离酶消化法体外培养人胚胎食管鳞状上皮细胞的方法研究

作     者：李万里 岑石强 黄富国 杨志明 解慧琪 

作者机构：四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2006年第20卷第4期

页      面：459-462页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2001AA216011) 国家自然科学基金资助项目(30100182)~~ 

主　　题：组织工程食管 鳞状上皮细胞 显微剥离 细胞培养 

摘      要：目的探讨利用显微剥离酶消化法行人胚胎食管鳞状上皮细胞原代培养的可行性,并对所得细胞进行纯化及传代培养。方法选择意外流产20周龄胎儿食管标本,通过显微剥离法获得菲薄食管黏膜上皮,经短时酶消化分离所得细胞,在10%胎牛血清混合培养基中培养,通过倒置显微镜、透射电镜及免疫组织化学方法鉴定所得细胞,并测定其生长曲线。结果倒置显微镜下见细胞呈不规则圆形或多边形,透射电镜可见其具有鳞状上皮细胞特征性的张力微丝,细胞表面微突起,细胞角蛋白免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色阳性表现,MTT法测定第2代细胞在传代培养3~4d达生长高峰。3、4d吸光度(A)值与1、2、5及6d比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论通过显微剥离酶消化法可获得足量、较纯食管鳞状上皮细胞,混合培养基中细胞能快速传代、扩增,适宜作为种子细胞构建组织工程食管。