抗猴痘病毒A35R蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作     者：欧阳蕾 吴佩璇 师江龙 潘勇兵 OUYANG Lei;WU Peixuan;SHI Jianglong;PAN Yongbing

作者机构：武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室湖北武汉430207 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2024年第52卷第4期

页      面：1-8页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：猴痘病毒 A35R蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 抗原检测 蛋白质亚单位疫苗 质量控制 

摘      要：目的制备抗猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)A35R蛋白单克隆抗体并建立其双抗体夹心ELISA检测方法,同时对方法进行验证。方法原核表达MPXV A35R蛋白并免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术制备抗A35R蛋白单克隆抗体,对单克隆抗体的特异性、结合活性进行鉴定;建立双抗体夹心ELISA检测方法,对该方法的线性范围、检测限、专属性、准确性、精密度进行验证。结果制备了7株抗MPXV A35R单克隆抗体。Western blot鉴定结果显示,7株单克隆抗体均与MPXV A35R蛋白及灭活MPXV发生特异性反应;7株单克隆抗体结合活性为11.35~27.73 ng/mL;抗体经配对筛选后,确定以7G5和2F5为最佳配对抗体,用于建立双抗体夹心ELISA方法。该方法对灭活MPXV抗原最低检测限为1.250×10~4 TCID50/mL,对MPXV A35R蛋白最低检测限为1.95 ng/mL,线性范围为3.91~125.00 ng/mL,线性回归方程为y=1.7320x-0.9208,R2=0.9843;该方法专属性较强且不与其他病毒及蛋白发生交叉反应;准确性验证结果显示,病毒抗原回收率为96.94%~110.04%;批间CV为0.26%~8.13%,批内CV为2.10%~5.48%。结论成功制备了抗MPXV A35R蛋白单克隆抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测方法。验证结果显示,该方法具有较高的灵敏度、准确度、重复性及专属性,可用于以A35R蛋白为基础的猴痘亚单位疫苗的生产质量控制。