四逆散、六味地黄丸诱导神经干细胞向神经元分化及对Wnt1、Wnt3a、β-catenin mRNA表达的影响

作     者：陈攀 徐志伟 敖海清 

作者机构：广西中医药大学壮医药学院广西南宁530001 广州中医药大学基础医学院广东广州510405 

出 版 物：《时珍国医国药》 (Lishizhen Medicine and Materia Medica Research)

年 卷 期：2016年第27卷第4期

页      面：777-780页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(No.81173144) 

主　　题：海马 神经干细胞 六味地黄丸 四逆散 

摘      要：目的观察四逆散、六味地黄丸对体外培养神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化为神经元的影响,并探讨其作用机制。方法选取第3代NSCs作为分组造模对象。空白对照组:DMEM/F12(1∶1)培养基加入10%胎牛血清。四逆散低剂量组:DMEM/F12(1∶1)培养基加入10%胎牛血清和四逆散低浓度煎剂(终浓度含生药量0.133 g·L-1)。四逆散高剂量组:DMEM/F12(1∶1)培养基加入10%胎牛血清和四逆散高浓度煎剂(终浓度含生药量0.267 g·L-1)。六味地黄丸低剂量组:DMEM/F12(1∶1)培养基加入10%胎牛血清和六味地黄丸低浓度煎剂(终浓度含生药量0.208 g·L-1)。六味地黄丸高剂量组:DMEM/F12(1∶1)培养基加入10%胎牛血清和六味地黄丸高煎剂(终浓度含生药量0.416g·L-1)。隔天换液1次,培养7 d。采用免疫细胞荧光化学技术检测各组神经元特异性烯醇酶单克隆抗体(neuron-specific enolase,NSE)阳性细胞数。采用荧光实时定量PCR法检测各组细胞的Wnt1、Wnt3a、β-catenin mRNA表达相对量。结果神经元分化率:六味地黄丸低剂量组(12.15±2.32)%;六味地黄丸高剂量组(12.58±1.70)%;四逆散低剂量组(12.28±1.01)%;四逆散高剂量组(11.84±1.01)%;空白对照组(6.16±1.42)%;空白对照组神经元分化率最低,与六味地黄丸低、高剂量组、四逆散低剂量组及四逆散高剂量组比较(P0.01)。Real time-PCR检测:Wnt1、Wnt3a、β-catenin在空白对照组表达最低,与六味地黄丸低、高剂量组及四逆散低、高剂量组比较有显著差异(P0.01)。结论四逆散、六味地黄丸可促进NSCs向神经元分化,其作用机制可能与上调Wnt1、Wnt3a及β-catenin表达,激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。