边缘无浆体SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：何德肆 徐平源 陈文承 李芬 胡涛 彭运潮 刘毅 

作者机构：湖南生物机电职业技术学院湖南长沙410128 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2011年第41卷第3期

页      面：262-266页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：湖南省教育厅重点项目(06A028) 湖南省教育厅项目(09C1209) 湖南养殖科研项目(200813) 

主　　题：边缘无浆体 MSP4基因 SYBRGreenⅠ 标准曲线 

摘      要：根据GenBank中边缘无浆体的MSP4基因序列(EU677383)设计2对引物(AmspF3/R3和Am-spF4/R4)并克隆MSP4部分基因,构建含有MSP4基因的标准质粒,以AmspF3/R3为引物进行荧光定量PCR,建立了边缘无浆体的MSP4SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用于临床血样检测。结果显示,该方法可以检测到1×102 copies/μL的标准质粒DNA,该方法对绵羊无浆体、附红细胞体、东方巴贝斯虫、组织滴虫提取的DNA均为阴性反应。结果表明,该方法与常规PCR方法比较,阳性及阴性符合率都为100%,且具有敏感、重复性好、无污染特性,并具有能准确定量的特点,说明该方法具有很好的应用前景和研究价值。