小鼠CD4^＋记忆性T淋巴细胞的产生、纯化、鉴定及皮肤移植的检测

作     者：朱鹏 陈义发 李丹 陈孝平 ZHU Peng;CHEN Yi-fa;LI Dan;CHEN Xiao-ping

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心武汉430030 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2007年第27卷第11期

页      面：1046-1049页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30571754) 留学回国人员科研启动基金项目[教外司留(2005)383] 

主　　题：记忆T细胞 免疫磁性分离 流式细胞术 酶联免疫斑点技术 移植 小鼠 

摘      要：目的建立CD4^＋记忆T细胞（memory T lymphocytes，Tm）的免疫磁珠分离方法，并检测其体外部分功能。方法借助小鼠皮肤移植模型，制备受鼠脾细胞悬液，运用免疫磁珠方法分离CD4^＋Tm，用台盼蓝染色法和流式细胞仪检测分选所得细胞的活性和纯度，并在体外用ELISPOT技术检测其不同抗原刺激时IFN-γ活性分泌频数。结果小鼠皮肤移植皮片平均存活时间为（13．6±0．9）d；分离所得CD4^＋Tm的活细胞百分率为（98．4±0．7）％；流式细胞术检测表型，其中CD4^＋CD8^-细胞比例占（96．06±2．49）％，CD44^＋CD62L^-细胞比例占（94．13±2．36）％，CD4^＋CCR7^-细胞比例占（96．39±1．93）％；在无刺激物作用或者大鼠脾细胞、供体脾细胞、刀豆素A等刺激物作用时，IFN-γ活性分泌频数分别为3±1、6±3、339±14、108±9个／10^4，差异有统计学意义。结论通过小鼠皮肤移植模型及免疫磁性分离技术，可制备高纯度无菌的CD4^＋Tm，其细胞活力不受影响，作用具有良好的供体特异性。这为深入研究Tm在移植物免疫方面的作用提供了技术资料。