以鸡恒定链(Ii)为载体的新城疫病毒-F蛋白表位基因疫苗的免疫原性

作     者：许发芝 叶红 余为一 Xu Fazhi;Ye Hong;Yu Weiyi

作者机构：安徽农业大学安徽省人兽共患病学重点实验室 黄山学院 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2010年第18卷第6期

页      面：1215-1220页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然基金项目(No.30671537)资助 

主　　题：新城疫病毒(NDV) 鸡恒定链(Ii) 基因疫苗 体液免疫 

摘      要：本文研究了以鸡恒定链基因(invariant chain,Ii)为载体的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F基因片段的基因疫苗及其小鼠的免疫应答。首先,用重叠延伸法经3轮PCR获得以NDV-F343表位基因(327-359AA)取代鸡恒定链中Ⅱ类分子相关肽段(class-Ⅱassociated invariant chain peptide,CLIP)片段序列,构建了基于恒定链的NDV内源性靶向基因疫苗(C1-△CLIP-Ii-F343)。其次,在观察C1-△CLIP-Ii-F343和无恒定链载体的C1-F343转染真核细胞中,发现它们均能在COS-7细胞中高效表达。最后,将25只68周龄的雌性Balb/c小鼠(Mus musculus)随机分为5组,用C1-△CLIP-Ii-F343和非靶向性疫苗(C1-F343)进行免疫,以C1-△CLIP-Ii、pEGFP-C1和生理盐水作为对照。经3次免疫后,取小鼠尾部血对小鼠的体液免疫进行检测。结果表明,在C1-△CLIP-Ii-F343和C1-F343免疫组小鼠血清中均可检测到针对NDV的特异性抗体,其滴度分别达到1/6400和1/1600。进一步Westernblot研究结果表明,抗体与接种NDV的鸡胚尿囊液和原核表达的PET-NDV-F306蛋白均产生特异性结合。研究结果提示,鸡恒定链作为载体的NDV基因疫苗能够刺激小鼠产生特异性的体液免疫应答,为新城疫疫苗开发提供了一个新的思路。