人端粒酶逆转录酶基因siRNA表达框架的构建和体外表达研究

作     者：刘习强 黄洪章 潘朝斌 王方金 张彬 梁蔚文 LIU Xi-qiang;HUANG Hong-zhang;PAN Chao-bin;WANG Fang-jin;ZHANG Bin;LIANG Wei-wen

作者机构：中山大学附属第二医院口腔颌面外科 中山大学达安基因诊断中心 林百欣医学实验中心 

出 版 物：《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期：2006年第41卷第7期

页      面：403-406页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30271423 30471896) 

主　　题：癌,鳞状细胞 RNA 基因治疗 

摘      要：目的探讨靶向小干扰RNA表达框架(SEC)对舌癌细胞内源性人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的特异性抑制作用。方法利用两步法PCR技术构建多条SEC,采用第5代聚酰胺-胺型树枝状高聚物(G5 PAMAM-D)纳米微球介导SEC转染Tca8113细胞,应用实时荧光定量RT-PCR技术和Western-blot等检测内源性hTERT的表达水平,并进一步筛选出最有效的小干扰RNA靶序列。结果针对不同靶位点设计的SEC干扰效果有显著差异,SEC-A的干扰效果最强,并且能以高度序列特异性方式沉默hTERT基因的表达;此外,转染次数与载体理化特性亦可影响SEC的干扰效应(P0．05)。结论RNA干扰效应主要取决于靶序列;G5 PAMAM-D纳米载体能够介导SEC-A高效抑制内源性hTERT基因的表达;hTERT基因有望成为舌癌基因治疗的理想靶点。