葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的重组表达及一步纯化

作     者：周进 银鹏 ZHOU Jin;YIN Peng

作者机构：清华大学深圳研究生院生命学部广东深圳518055 南京林业大学理学院江苏南京210037 

出 版 物：《过程工程学报》 (The Chinese Journal of Process Engineering)

年 卷 期：2009年第9卷第5期

页      面：981-986页

核心收录：

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：中国博士后基金资助项目(编号:20080440359) 

主　　题：葡萄糖苷酶 绿色木霉 毕赤酵母 表达 一步纯化 

摘      要：从绿色木霉中克隆了葡萄糖苷酶bg基因,构建入表达载体pPIC9k-His6中,然后在AOX1启动子的控制下,在毕赤酵母GS115菌株中表达.在5L发酵罐中发酵120h,重组***+菌株湿重达360.6g/L,葡萄糖苷酶浓度和酶活分别为2.1mg/mL和73.5U/mL.经亲和层析一步纯化后,得到了电泳纯的葡萄糖苷酶.HPLC分析显示其纯度为95.6%,比酶活为71.9U/mg.纯化过程酶得率为73.6%,纯化倍数为42.6.纯酶的等电点为5.0,最适温度为50℃,最适pH为6.5.金属离子Ag+,Ca2+,Cu2+,Fe2+及SDS对葡萄糖苷酶活性有抑制作用,而Mg2+,Mn2+,K+能增强葡萄糖苷酶活性,其中1mol/LMg2+能使酶活提高20%.