沉默长链非编码RNA-PVT1通过上调微小RNA-145抑制胃癌细胞增殖的机制

作     者：何艳新 董玉玺 杨文浩 陈振国 刘超 He Yanxin;Dong Yuxi;Yang Wenhao;Chen Zhenguo;Liu Chao

作者机构：郑州大学第二附属医院普外科郑州450014 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2024年第41卷第7期

页      面：1483-1486页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20210397、LHGJ20210428) 

主　　题：长链非编码RNA-PVT1 胃癌 沉默 机制 

摘      要：目的对筛选出的关键基因长链非编码RNA(lncRNA)-PVT1及微小RNA(miR)-145进行细胞实验, 通过沉默lncRNA-PVT1探讨其在胃癌中发挥作用的分子机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测lncRNA-PVT1在所收集的53例胃癌病理标本中的表达量。采用RNA干扰技术敲低lncRNA-PVT1在HGC-27、AGS中的表达。将实验分为lncRNA-PVT1-si组和NC组, 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell小室法检测lncRNA-PVT1对HGC-27、AGS增殖、迁移和侵袭等方面的影响。通过实时荧光定量PCR法检测miR-145在lncRNA-PVT1-si组和NC组中的表达量;通过免疫双荧光素酶实验及功能回补实验验证lncRNA-PVT1及miR-145是否存在直接结合位点;通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法(Western blot)法检测lncRNA-PVT1-si组和NC组中人中胚层特异性转录同源蛋白(MEST)的表达量。定性资料使用χ^(2)检验, 定量资料采取独立样本t检验。结果 lncRNA-PVT1在胃癌组织中表达量高于正常组织, 差异有统计学意义(t=5.299, P0.05), 在HGC-27、AGS中表达量高于GES-1, 差异有统计学意义(t=7.714, P0.05)、(t=8.679, P0.05)。CCK-8法, lncRNA-PVT1-si组吸光度值在观察终点72 h明显低于NC组, 差异有统计学意义(HGC-27细胞, t=8.054, P0.05、AGS细胞, t=8.240, P0.05)。Transwell迁移法, lncRNA-PVT1-si组低于NC组迁移细胞数量, 差异有统计学意义(HGC-27细胞, t=5.460, P0.05、AGS细胞, t=6.862, P0.05)。Transwell侵袭法, lncRNA-PVT1-si组低于NC组迁移细胞数量, 差异有统计学意义(HGC-27细胞, t=4.036, P0.05、AGS细胞, t=7.532, P0.05)。miR-145在lncRNA-PVT1-si组中表达量高于NC组, 差异有统计学意义(HGC-27细胞, t=8.381, P0.05、AGS细胞, t=7.881, P0.05)。免疫双荧光素酶实验及功能回补实验结果证实lncRNA-PVT1与miR-145存在直接结合位点, miR-145与MEST存在直接结合位点;MEST在lncRNA-PVT1-si组中表达量低于NC组, 差异有统计学意义(HGC-27细胞, t=8.821, P0.05, AGS细胞, t=12.760, P0.05)。结论 lncRNA-PVT1在胃癌细胞中上调;敲低lncRNA-PVT1通过上调miR-145来减少MEST的表达抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。