橡胶树白粉菌分生孢子DNA的微量提取方法建立

作     者：冯德宇 梁晓宇 王晗茉 黄曦泽 周绍尧 王萌 张宇 FENG Deyu;LIANG Xiaoyu;WANG Hanmo;HUANG Xize;ZHOU Shaoyao;WANG Meng;ZHANG Yu

作者机构：海南大学三亚南繁研究院海南三亚572024 海南大学热带农林学院海南儋州571737 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：2024年第45卷第7期

页      面：1314-1322页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.32160370) 国家天然橡胶产业技术体系病害岗位专家经费项目(No.CARS-33-BC1) 海南省研究生创新科研课题(No.Qhys2022-107) 

主　　题：橡胶树 白粉菌 分生孢子 DNA 微量提取 

摘      要：由橡胶树白粉菌(Erysiphe quercicola)引发的橡胶树白粉病是我国天然橡胶产业中的一个重要病害,其对乳胶产量造成了严重威胁。随着预测预报技术的不断进步,结合qPCR检测和孢子捕捉技术有望成为高效预测白粉病流行的新方法。本研究针对橡胶树白粉菌分生孢子DNA的微量提取,通过比较不同预处理方式、不同材质的研磨珠以及不同类型的研磨装置,筛选出了最适合的孢子样品研磨体系。进一步比较了CTAB法与几种商业提取试剂盒的提取效率,最终确定了一种可行的孢子DNA微量提取方法:将白粉菌分生孢子水溶液置于4℃超声处理10 min后加入2 mm氧化锆珠0.2 g、0.4~0.6 mm玻璃珠0.2 g以及0.2 mm氧化锆珠0.2 g,用组织研磨仪在4℃70 Hz条件下研磨40 s,停10 s,20个循环,最后使用CTAB法提取DNA。通过qPCR定量,可以在101个/mL的孢子悬浮液当中检出橡胶树白粉菌DNA,且不受田间复杂情况的干扰,具有高灵敏度和强特异性,为橡胶树白粉病的预测预报提供了可靠的理论依据和有效的技术手段。