马铃薯Y病毒CI蛋白密码子优化、真核表达体系建立及单克隆抗体制备

作     者：尹国英 贾蒙骜 常永春 张盼 李震 蔡长春 YIN Guoying;JIA Mengao;CHANG Yongchun;ZHANG Pan;LI Zhen;CAI Changchun;无

作者机构：贵州省烟草科学研究院贵阳550081 山西农业大学农学院晋中030800 贵州省烟草公司黔西南州公司兴义562400 湖北省烟草科学研究院武汉430030 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2024年第54卷第3期

页      面：544-554页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32160631) 中国烟草总公司贵州省公司科技项目(2022XM08) 中国烟草总公司贵州省公司科技项目(2021XM08) 贵州省烟草科学研究院科技项目(GZYKY2021-02) 贵州省科技计划项目(4102) 

主　　题：CI蛋白 密码子偏好性 真核表达 单克隆抗体 

摘      要：编码马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)CI蛋白的核酸序列具有多个类似原核生物启动子元件的区域,有可能在原核细胞中翻译出对原核细胞具有毒性的蛋白,因此该序列难以按照常规的试验方法进行载体构建。在不改变CI氨基酸序列的基础上,对编码CI的核酸序列进行改造,成功构建了含有CI开放阅读框(ORF)的表达载体,利用真核无细胞蛋白表达系统成功实现了CI蛋白的表达。通过亲和层析纯化,将CI蛋白免疫Balb/c小鼠,共制备了6株单克隆抗体。间接ELISA和Western blot免疫印迹证明,其中4B7_2D6(IgG1)单克隆抗体,灵敏度最高,特异性最强。CI蛋白的成功表达及单克隆抗体的获得,为后续研究CI蛋白的结构与功能提供了前提条件,对进一步探索CI与植物蛋白互作机理以及PVY的检测技术具有重要意义。