浸润性突眼相关基因/cDNA片段的筛选

作     者：郑建国 张英 苏从冶 龚日祥 Zheng Jianguo;Zhang Ying;Shu Congye;Gong Rixiang

作者机构：卫生部北京医院核医学科北京100730 山东省聊城市人民医院核医学科聊城252000 吉林省四平市中心医院影像中心四平136000 四川大学华西医院普外科成都610041 

出 版 物：《生物医学工程学杂志》 (Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2006年第23卷第2期

页      面：383-387页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助(30270633) 

主　　题：甲亢 浸润性突眼 抑制消减杂交 差异筛选 

摘      要：筛选浸润性突眼相关基因／cDNA片段，为探究浸润性突眼发生的分子机制莫定基础。采用抑制消减杂交技术，以甲亢伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为tester，甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为driver，经过两轮消减杂交和两轮PCR，获得二者之间的消减PCR产物，将产物插入至pCR2．1载体，转化感受态细胞*** DH5α，进行蓝白筛选。随机挑取48个白色菌落，经过Colony PCR，其中有1个转化子的扩增产物为双带，其余均为0．2～2kb之间的单一条带。将Colony PCR产物点样于同一尼龙膜上，一式两份，分别与地高辛标记的甲亢伴突眼和甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针杂交。以与甲亢伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针有杂交信号，而与甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆。筛选的阳性率为50％左右，阳性克隆中的插入片段即是与浸润性突眼相关的基因／cDNA片段。