瞬时感受电位通道6在同型半胱氨酸诱导的足细胞自噬中的作用

作     者：卢冠军 汪乐新 赵静 刘超 熊建团 焦运 杨安宁 姜怡邓 田宇佳 徐遥琴 石青 刘莉 张亚兰 白志刚 李淑娟 

作者机构：宁夏医科大学总医院泌尿外科 宁夏医科大学第一临床医学院 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室 绍兴复康护理院 宁夏回族自治区人民医院检验科 宁夏医科大学总医院急诊科 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82060139,81900273) 宁夏回族自治区重点研发计划(2020BFH02003,2021BEG02033,2020BFH02001) 中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2019PT330002) 

主　　题：足细胞自噬 同型半胱氨酸 瞬时感受电位通道6 

摘      要：目的 探讨在同型半胱氨酸(Hcy)作用下瞬时感受电位通道6(TRPC6)对足细胞自噬的调控作用。方法 将小鼠肾脏足细胞分为对照组与Hcy组(40、60、80、100 μmol/L的Hcy刺激48 h)，采用qRT?PCR检测TRPC6 mRNA水平，筛选出Hcy的最佳浓度后，后续均以此浓度进行实验。采用Western blotting检测LC3 Ⅱ、P62自噬相关蛋白的表达水平，以及足细胞结构蛋白Nephrin、podocin的表达水平；采用qRT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测两组TRPC6 mRNA及蛋白的表达水平。转染过表达或干扰TRPC6的细胞分别设置为：(1)对照组(不做处理)、TRPC6过表达阴性对照组、TRPC6过表达组；(2)对照组(不做处理)、TRPC6干扰阴性对照组和TRPC6干扰组(si-1、si-2、si-3)，并采用qRT?PCR检测TRPC6表达水平。再将过表达或干扰TRPC6后的细胞分别设置为：(1)对照组(不做处理)、Hcy组(加入80 μmol/L Hcy)、TRPC6过表达对照+Hcy组、TRPC6过表达+Hcy组；(2)对照组(不做处理)、Hcy组、TRPC6干扰对照＋Hcy组、TRPC6干扰+Hcy组，并采用Western blotting检测P62、LC3 Ⅱ、TRPC6蛋白的表达水平。结果 qRT?PCR检测结果显示，与对照组比较，TRPC6 mRNA表达水平随Hcy浓度增加而升高，其中80 μmol/L Hcy干预后的表达水平最高，因此将80 μmol/L作为Hcy的最佳干预浓度。此时，自噬相关蛋白LC3 Ⅱ的表达水平升高、P62表达水平降低(P0.05)。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，Hcy组中足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin的表达水平明显降低(P0.05)。qRT?PCR检测结果显示，与对照组比较，Hcy组中TRPC6 mRNA表达水平明显升高(P0.05)；与过表达TRPC6阴性对照组比较，TRPC6过表达组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P0.05)；与干扰TRPC6阴性对照组比较，干扰TRPC6组的TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。Western blotting检测结果显示，与过表达TRPC6阴性对照组相比，过表达TRPC6+Hcy组中自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达水平明显升高，P62表达水平明显降低(P0.05)；与干扰TRPC6阴性对照+Hcy组相比，干扰TRPC6+Hcy组中自噬相关蛋白LC3 Ⅱ表达水平明显降低，P62表达水平明显升高(P0.05)。结论 Hcy可诱导肾脏足细胞自噬，抑制TRPC6的表达可明显减轻足细胞的自噬性损伤。