同时检测贝类派琴虫和包纳米虫的双重LAMP方法的建立

作     者：王彩霞 冯春燕 王巧黎 袁向芬 邓俊花 吕继洲 吴绍强 WANG Cai-xia;FENG Chun-yan;WANG Qiao-li;YUAN Xiang-fen;DENG Jun-hua;LV Ji-zhou;WU Shao-qiang

作者机构：中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京100029 青岛市中心医疗集团青岛266005 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第42卷第8期

页      面：1935-1942页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家质检公益项目(201210018) 国家科技支撑计划课题(2012BAK11B04) 

主　　题：贝类寄生虫病 环介导等温扩增反应(LAMP) 检测 派琴虫 包纳米虫 

摘      要：为满足贝类寄生虫快速检测需求,本研究根据GenBank中发布的派琴虫ITS序列和包纳米虫18SrRNA序列的保守区域分别设计LAMP扩增引物,分别建立了两种寄生虫的单重LAMP检测方法,进一步对反应体系进行优化,组装成两种寄生虫的双重LAMP方法,同时还进行了特异性检测和敏感性检测,并通过对扩增产物进行限制性内切酶酶切检验双重LAMP方法的准确性。结果表明本研究建立的贝类寄生虫双重LAMP方法具有较好的特异性,检测派琴虫时的最低检测限为10拷贝/μL质粒DNA,检测包纳米虫时的最低检测限为100拷贝/μL质粒DNA,同时酶切试验也验证了双重LAMP检测结果的准确性。对随机采自东海和黄海的20份菲律宾蛤仔和10份美国进口牡蛎的检测结果显示,该双重LAMP方法在口岸检疫工作中可以作为派琴虫和包纳米虫的快速检测方法。