长链游离脂肪酸对滋养细胞线粒体三羟基酰基辅酶A脱氢酶基因启动子区甲基化程度的影响

作     者：孟然 杨孜 王海玲 王雁玲 李凤秋 韩怡炜 Meng Ran;Yang Zi;Wang Hailing;Wang Yanling;Li Fengqiu;Han Yiwei

作者机构：北京大学第三医院妇产科100191 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2015年第95卷第29期

页      面：2387-2392页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：国家自然科学基金(81241021) 北京市自然科学基金(7132215) 

主　　题：长链游离脂肪酸 基因甲基化 长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶 滋养层细胞 

摘      要：目的 探讨长链游离脂肪酸对胎盘滋养细胞线粒体β氧化循环长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）基因启动子区甲基化程度影响,以及对甲基化修饰的时间效应.方法 体外培养原代人绒毛滋养细胞及HTR-8/SVneo永久性人滋养细胞,研究组采用长链游离脂肪酸孵育滋养细胞（LC-FFA组）,并以短链游离脂肪酸（SC-FFA组）和中链游离脂肪酸（MC-FFA组）作为不同链长游离脂肪酸对照组,空白对照组无脂肪酸（F-FFA组）.分别在孵育24、48及72 h收集细胞并提取DNA.在LCHAD基因转录起始位点上游2 000 bp区域内序列预测CpG岛位置,设计甲基化检测位点和引物.采用Sequenom MassArray甲基化DNA定量分析平台检测不同组CpG岛各CpG位点的甲基化程度后进行各甲基化位点和CpG岛的统计学分析.结果 （1）在LCHAD基因转录起始位点上游2 000bp区域内的17个CpG位点中获得11个位点（65％）的甲基化程度,8个为单独位点,3个为复合位点（-984、-960、-899、-853、-811、-796、-774、-727、-615、-595、-579）.在不同研究组中每个位点的甲基化变化程度各不同,其中-899位点变化最明显.（2）LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度变化分析：①长、中链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势：LC-FFA组孵育72 h（0.55±0.08）比孵育48 h（0.35±0.12）及24 h（0.31±0.04）均明显升高（P0.05）,48 h虽比24 h升高,但差异无统计学意义（P0.05）.MC-FFA组孵育72 h（0.44±0.05）比孵育24 h（0.31±0.04）明显升高（P0.05）.②不同链长游离脂肪酸在不同作用时间影响LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度比较：LC-FFA组孵育72 h的甲基化程度比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高（P0.05）.（3）作用72 h游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区11个CpG位点甲基化程度影响比较：在LC-FFA组和MC-FFA组-899位点甲基化程度明显高于其他位点（P0.05）.（4）长链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区-899位点甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势（P0.05）.LC-FFA组孵育72 h比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高（P0.05）.结论 长链游离脂肪酸比中链和短链游离脂肪酸呈现较大的滋养细胞LCHAD基因启动子区甲基化的修饰作用,并伴随作用时间延长表现出明显的时间依赖效应;甲基化程度改变主要发生在LCHAD基因启动子区-899位点.