表达猪源GM-CSF蛋白的重组PRRSV构建及鉴定

作     者：虞凌雪 周艳君 姜一峰 童武 高飞 夏天奇 王康 杨莘 李丽薇 程群 童光志 

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所猪病研究室上海200241 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第36卷第4期

页      面：260-264页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金："863"计划项目"家畜病毒病基因工程疫苗创制"(2011AA10A208) "973"计划课题(2014CB542702) 科研院所技术开发研究专项(2012EG134237) 上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2012)第2-5号] 上海市重点基础研究项目(11JC1415200) 

主　　题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GM-CSF rHN4-△ 110-GM-CSF 

摘      要：为提高猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)弱毒疫苗的免疫效果,本研究以高致病性PRRS弱毒疫苗株HuN4-F112感染性分子克隆为基础,在NSP2区域删除了110个氨基酸,将猪源GM-CSF基因和PRRSV ORF6转录引导序列(TRS6)通过融合PCR方法插入HuN4-F112疫苗株的ORF1b和ORF2a之间,构建了全长重组质粒pHN4-△110-GM-CSF。将该重组质粒采用SwaⅠ酶切线性化,经体外转录病毒基因组RNA后转染BHK-21细胞,然后在Marc-145细胞中进行病毒拯救及传代。结果显示重组病毒感染Marc-145细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR、DNA测序、MluⅠ酶切鉴定和免疫荧光鉴定结果显示,救获的重组PRRSV含有GM-CSF基因并能够有效表达,将其命名为rHN4-△110-GM-CSF。生物学特性分析表明重组病毒与亲本病毒在Marc-145细胞中具有相似的生长特性,插入的外源基因具有良好的遗传稳定性。由于GM-CSF能够活化树突状细胞,是一种良好的免疫佐剂。该重组病毒的构建为动物体内免疫保护攻毒试验评价奠定了基础。