小干扰RNA对人视网膜色素上皮细胞缝隙连接蛋白43表达水平的调节

作     者：司艳芳 王凤翔 何守志 吕杨 张娟美 黄倩香 SI Yan-Fang;WANG Feng-Xiang;HE Shou-Zhi;LV Yang;ZHANG Juan-Mei;HUANG Qian-Xiang

作者机构：解放军总医院第二附属医院眼科北京市100091 解放军总医院眼科北京市100853 解放军总医院肾脏内科实验室北京市100853 同仁医院眼科北京市100730 解放军总医院骨科实验室北京市100853 

出 版 物：《眼科新进展》 (Recent Advances in Ophthalmology)

年 卷 期：2008年第28卷第6期

页      面：412-415页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：北京市自然科学基金资助(编号:7032046)~~ 

主　　题：小干扰RNA 视网膜色素上皮细胞 缝隙连接蛋白43 

摘      要：目的观察体外化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,cx43)基因和蛋白表达的影响。方法设计合成针对人cx43基因的小干扰片段(siR-NA1、siRNA2、siRNA3)和1条阴性对照siRNA0,在脂质体的介导下转染培养的人RPE细胞,采用RT-PCR确定最有效的抑制片段;针对siRNA的有效片段,分为不同浓度(50～30nmol.L-1)转染培养细胞,培养72h后进行MTT增生试验,观察其对人RPE细胞增生能力的影响,确定最有效的浓度;siRNA转染细胞后,分别培养12h、24h、48h、72h后进行Westonblot试验,观察不同时间点其对cx43蛋白表达的影响。结果体外合成的3条siRNA均在一定程度上抑制cx43基因的合成,其中siRNA1是最有效的抑制片段,根据条带灰度比其抑制率达到72%;siRNA1可以显著促进人RPE细胞的增生,增生率达到146%;明显抑制其cx43蛋白的表达(P0.01),抑制率达到61%;从浓度组间结果可以看出,siRNA的最佳作用浓度是250nmol.L-1,在此浓度之前效率与浓度呈正比,超过此浓度后各浓度组间差异无统计学意义;比较不同时间点,siRNA转染人RPE细胞24h后开始抑制cx43表达,48h后对cx43蛋白合成抑制率最明显。结论化学合成的siRNA可以有效抑制培养的人RPE细胞cx43基因的表达,促进细胞的增生,这种基因沉默作用可能对于视网膜色素上皮组织的再生有一定作用。