H因子结合蛋白抗原含量双抗夹心ELISA检测方法的优化与应用

作     者：龙静 纪国存 王欣惠 孙艳艳 冀颖 苏桂民 杜琳 LONG Jing;JI Guocun;WANG Xinhui;SUN Yanyan;JI Ying;SU Guimin;DU Lin

作者机构：北京智飞绿竹生物制药有限公司研发中心北京市细菌性疫苗工程技术研究中心北京100176 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2024年第52卷第3期

页      面：34-44页

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主　　题：H因子结合蛋白 抗原 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 疫苗 

摘      要：目的优化双抗夹心-酶联免疫吸附法(double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测H因子结合蛋白(factor H-binding protein,fHBP)抗原含量的方法,并将其应用于重组B群脑膜炎球菌疫苗体外相对效力评价。方法筛选4种抗fHBP单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAb)适宜的抗体组合,通过方阵滴定法确定适宜的捕获抗体和酶标检测抗体稀释倍数、包被液、包被条件和显色时间,对优化后方法的专属性、线性、检测限、精密度和准确度进行了验证,并利用该方法检测fHBP蛋白相关制品的抗原含量。结果确定了适宜的双抗体检测组合以及试验条件(以柠檬酸缓冲液,4℃孵育16 h),在以柠檬酸缓冲液包被捕获抗体5.0000μg/mL、检测抗体1∶2000稀释、显色时间15 min的条件下,A450 nm-fHBP浓度曲线相关系数(r)0.98,平行孔CV0.05)。结论优化后的方法可用于fHBP抗原含量的检定。