双光子显微镜技术下胶质瘤-壁细胞在体多荧光示踪小鼠模型的建立及应用

作     者：马铖延 杨星九 史旭东 高苒 MA Chengyan;YANG Xingjiu;SHI Xudong;GAO Ran

作者机构：中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 国家人类疾病动物模型资源库北京100021 国家卫生健康委员会比较医学重点实验室北京100021 北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心北京100021 

出 版 物：《中国实验动物学报》 (Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica)

年 卷 期：2024年第32卷第6期

页      面：702-711页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071002[理学-动物学] 

基　　金：国家重点研发计划(2022YFF0710700) 

主　　题：双光子显微镜 胶质瘤 壁细胞 基因工程小鼠 动物模型 

摘      要：目的建立双光子显微镜下可视化胶质瘤、壁细胞和血管的活体自发荧光的基因小鼠模型并进行评价。方法以PDGFRβ-Cre^(+/-):Rosa26-tdTomato+/-基因工程小鼠为观察壁细胞和血管结构的载体,接种GL261-CFP小鼠胶质瘤细胞并对颅骨进行透明化,通过双光子显微镜动态跟踪观察胶质瘤增殖侵袭过程中血管与壁细胞的动态变化。结果通过基因鉴定证实PDGFRβ-Cre^(+/-):Rosa26-tdTomato+/-基因工程小鼠成功繁育。对比C57BL/6小鼠,基因工程小鼠的形态外观和繁殖等无显著性差异,组织苏木素-伊红(HE)染色切片分析显示脏器发育无异常。Tamoxifen诱导下基因工程小鼠的Cre重组酶活性至第7天作用完全。接种GL261-CFP后观察到胶质瘤增殖侵袭的动态过程及肿瘤内血管形态结构紊乱、游离壁细胞增多。结论成功构建了荧光可视化壁细胞的基因工程小鼠,分别利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖标记血管和青色荧光标记肿瘤细胞,使用玻璃圆片与固定环替代小鼠颅骨,实现了活体状态下长期稳定地动态跟踪小鼠接种脑肿瘤后血管及血管支持细胞的形态结构变化,为研究脑胶质瘤提供了病理可视化的动物模型。