WNT1诱导信号通路蛋白1在非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制

作     者：何鑫 张子龙 金鑫 黄乐 温松奇 游建 He Xin;Zhang Zilong;Jin Xin;Huang Le;Weng Songqi;You Jian

作者机构：武汉市第四医院肝胆胰疝外科武汉430033 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2024年第41卷第5期

页      面：963-968页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金(320.6750.2023-11-8) 

主　　题：WNT1诱导信号通路蛋白1 非酒精性脂肪性肝炎 脂质代谢 腺苷酸活化蛋白激酶通路 脂肪过氧化 

摘      要：目的:探究WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的功能定位及治疗作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠购于北京维通利华公司,采取简单随机抽样法分为5组,每组10只,正常组喂养普通饲料,通过喂养高脂高胆固醇饲料14周制备NASH小鼠模型,在造模过程中分别腹腔注射IgG单克隆抗体,0.1 g/kg WISP1高亲和力单克隆抗体,0.2 g/kg WISP-1高亲和力单克隆抗体为IgG、低剂量WISP1抗体组和高剂量WISP1抗体组,每周2次,连续给药14周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖水平。苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)染色、油红O染色观察肝组织病理变化。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测小鼠肝组织中白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平。检测肝组织总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性水平,活性氧(ROS)荧光染色检测肝组织中活性氧含量;免疫组织化学(IHC)检测肝组织WISP-1、乙酰辅酶a合成酶(ACS)蛋白表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测肝组织肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1(PCG-1α)蛋白表达水平。结果:模型组小鼠血清AST、ALT、血糖水平高于正常组[(245.01±57.57)U/L比(37.28±4.23)U/L、(218.96±55.27)U/L比(49.81±10.57)U/L、(25.73±2.29)mmol/L比(8.06±0.51)mmol/L,P0.01];模型组病理表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润、多处坏死灶;模型组小鼠肝组织炎症因子(IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α)mRNA水平高于正常组(7.49±059比1.00±0.38、5.57±3.22比1.00±0.59、4.86±3.86比1.00±0.34、10.18±3.24比1.00±0.17,P0.01);MDA含量高于正常组[(3.75±0.40)nmol/ml比(2.22±0.24)nmol/ml,P0.01],GSH、SOD活性低于正常组[(0.22±0.06)ng/ml比(0.49±0.15)ng/ml、(2.19±0.23)pg/ml比(4.59±0.22)pg/ml,P0.01],ROS含量高于正常组(4.91±0.31比1.00±0.12,P0.01);同时PGC-1α、ACS蛋白表达高于正常组[(2.19±0.084比1.00±0.09、(62.97±2.38)%比(26.72±0.73)%,P0.01],CPT1表达低于正常组(0.55±0.01比1.00±0.13,P0.01)。低、高剂量WISP1抗体组小鼠血清AST、ALT、血糖水平低于模型组[(65.53±25.85)、(53.49±12.22)U/L比(245.01±57.57)U/L,(73.93±23.670)、(60.88±23.38)U/L比(218.96±55.27)U/L,(20.07±2.03)、(16.46±3.71)mmol/L比(25.73±2.29)mmol/L,P0.01],低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润、坏死程度降低,低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝组织IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA低于模型组(2.98±0.31、2.579±0.22比7.49±1.57,1.83±0.35、2.53±0.32比5.57±1.03,1.62±0.24、1.52±0.34比4.86±1.33,2.63±0.56、2.12±0.37比10.18±2.31,P0.05),高剂量WISP1抗体组小鼠MDA含量低于模型组[(1.83±0.694)nmol/ml比(3.70±0.50)nmol/ml,P0.01],GSH、SOD活性高于模型组[(0.45±0.12)ng/ml比(0.22±0.06)ng/ml、(5.50±0.98)pg/ml比(2.19±0.40)pg/ml,P0.01],活性氧含量低于模型组(0.51±0.06比4.91±0.31,P0.01)。低、高剂量WISP1抗体组PGC-1α、ACS蛋白表达低于模型组(1.22±0.16、1.07±0.05比2.19±0.08,(33.50±3.45)%、(35.38±3.65)%比(62.97±2.38)%,P0