简易密封袋构建人小胶质细胞氧糖剥夺/复氧模型过程及其评价

作     者：刘彩 张冉 朱梦林 廖茗 孔钰 李曙 洪云 

作者机构：皖南医学院第一附属医院弋矶山医院超声科 皖南医学院基础医学院病理生理学教研室 皖南医学院第一附属医院弋矶山医院胃肠外科 皖南医学院公共卫生学院 

出 版 物：《武汉大学学报(医学版)》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2024年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：安徽省高校自然科学研究重点项目(编号:2023AH051773) 2022年度活性生物大分子研究安徽省重点实验室校级开放课题(编号:LAB202208) 安徽省大学生创新创业训练计划(编号:S202210368011) 

主　　题：简易密封袋 人小胶质细胞 氧糖剥夺/复氧 缺血性脑卒中 

摘      要：目的：体外构建人小胶质细胞HMC3氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型，为治疗缺血性脑卒中提供新思路。方法：利用密封袋对HMC3细胞进行氧糖剥夺，缺氧不同时间后再复氧24 h。倒置显微镜下观察细胞形态，细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性，乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞LDH含量，台盼蓝染色观察细胞存活率，Hoechst/PI双染、AnnexinⅤ-FITC/PI染色观察细胞凋亡坏死情况。比较不同时间缺氧复氧24 h的结果，选择最佳缺氧时间，建立稳定的OGD/R模型。结果：与对照组（0 min）相比，OGD处理组细胞形态变圆，突起消失，胞质凝聚，胞核固缩、碎裂，细胞膜模糊不清，不规则细胞比例增多；细胞活性随缺氧时间延长明显降低（P0.000 1）；上清LDH含量随缺氧时间延长而逐渐升高（P0.01）；台盼蓝染色时拒染细胞数随缺氧时间延长逐渐减少（P0.001）；细胞凋亡坏死量随缺氧时间延长逐渐增多（P0.05）。与对照组相比，OGD/R处理组细胞形态基本正常，密度增加，随着缺氧时间延长，细胞密度增加减少；细胞活性随缺氧时间延长逐渐下降（P0.01）；上清LDH含量随缺氧时间延长发生明显上升（P0.000 1）；台盼蓝染色时拒染细胞数随缺氧时间延长逐渐减少（P0.01）；细胞凋亡坏死量随缺氧时间延长逐渐增多（P0.05）。结论：氧糖剥夺/复氧24 h后HMC3细胞存活率、LDH释放量、凋亡坏死细胞量呈时间依赖性，且缺氧45 min复氧24 h为最佳OGD/R模型时间。利用简易密封袋的方法可成功构建OGD/R模型。