Hsp60受体靶向重组乳酸菌的构建及特性研究

作     者：田野 张婷婷 邵鑫 马冬妮 林震堃 白帆 王娟 张冬星 

作者机构：吉林农业大学动物科学技术学院/动物医学院 

出 版 物：《经济动物学报》 (Journal of Economic Animal)

年 卷 期：2024年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(32102681) 吉林省自然科学基金项目(20220101311JC) 

主　　题：Hsp60 重组乳酸菌 黏膜免疫 

摘      要：维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）广泛分布于各种淡水、污水等水环境中，可感染鱼、虾、贝类等水生生物及人类等哺乳动物，临床症状严重。乳酸菌可定植并存活于动物及人类胃肠道黏膜表面，作为肠道常生菌，其调节免疫应答、异源蛋白表达能力和维持肠道菌群平衡的特点成为新一代黏膜疫苗载体的强有力候选者。本研究扩增了*** TH0426株具有黏附能力的抗原黏附蛋白aha、侵袭蛋白Inp、菌毛亚基CsgA及CsgG基因，以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NC8为递呈载体，构建4株重组乳酸菌LP-pPG-aha、LP-pPG-Inp、LP-pPG-CsgA及LP-pPG-CsgG。通过Western blot和间接免疫荧光验证靶标蛋白表达情况，并以斑马鱼成纤维上皮细胞AB.9为体外细胞模型进一步检测4株重组乳酸菌对细胞的黏附与侵袭能力。此外，通过荧光定量PCR检测A. veronii与重组乳酸菌共孵育后Hsp60基因、促炎因子及肠道紧密连接蛋白因子的表达水平。结果显示，4株重组乳酸菌蛋白分子量分别在43 kDa、15 kDa、55 kDa和30 kDa处见清晰条带，且均可在菌体表面检测到绿色荧光信号。4株重组乳酸菌对AB.9细胞均有较强的黏附能力与侵袭能力，并通过与致病菌竞争黏附和侵袭的方式来降低***的感染能力。同时，可促进AB.9细胞内Hsp60表达，下调促炎因子IL-6、IL-10、IL-1β及TNF-α的转录水平，并促进紧密连接蛋白Occludin、CLDN1和ZO-1基因的表达。本研究旨在评估肠上皮细胞被致病菌侵袭感染过程中调节炎症反应的保护作用，为探究工程益生菌抗A. veronii感染介导的黏膜免疫应答机制研究提供基础。