人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞系的建立及鉴定

作     者：徐梦丽 王其飞 王静宜 陆语豪 秦泽莲 Xu Mengli;Wang Qifei;Wang Jingyi;Lu Yuhao;Qin Zelian

作者机构：北京大学第三医院成形外科北京100191 

出 版 物：《中华整形外科杂志》 (Chinese Journal of Plastic Surgery)

年 卷 期：2024年第40卷第5期

页      面：545-554页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82172216) 

主　　题：瘢痕疙瘩 成纤维细胞 永生化 细胞系 染色体核型鉴定 基因 

摘      要：目的尝试构建永生化的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFbs)系,并对其功能进行鉴定。方法标本取自1例2019年11月在北京大学第三医院行耳垂瘢痕疙瘩手术切除的32岁女性患者。将获得的瘢痕疙瘩去除皮下脂肪和表皮,应用组织贴壁法进行分离和培养,获得原代KFbs,以胰蛋白酶消化法进行传代培养;用SV40慢病毒感染原代KFbs,经过嘌呤霉素筛选纯化、传代扩增,获得永生化的人KFb系。对原代KFbs及其细胞系进行染色体核型分析、短串联重复序列(STR)和性别基因检测,来鉴定细胞系身份;采用CCK-8法检测原代KFbs和细胞系增殖能力,并分别用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测其特定基因(PGK1、ENO1、LDHA、GLUT1、TGF-β1、COL1、COL3、FN)的mRNA和蛋白表达水平。原代KFbs与细胞系间相关数据比较采用t检验,P0.05)。结论成功建立了永生化的人KFbs系,其形态、表征和功能未发生明显改变,且其增殖速度较原代细胞增快。