人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞系的建立及鉴定
Establishment and identification of a human keloid fibroblasts cell line作者机构:北京大学第三医院成形外科北京100191
出 版 物:《中华整形外科杂志》 (Chinese Journal of Plastic Surgery)
年 卷 期:2024年第40卷第5期
页 面:545-554页
核心收录:
学科分类:1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含:普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学]
主 题:瘢痕疙瘩 成纤维细胞 永生化 细胞系 染色体核型鉴定 基因
摘 要:目的尝试构建永生化的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFbs)系,并对其功能进行鉴定。方法标本取自1例2019年11月在北京大学第三医院行耳垂瘢痕疙瘩手术切除的32岁女性患者。将获得的瘢痕疙瘩去除皮下脂肪和表皮,应用组织贴壁法进行分离和培养,获得原代KFbs,以胰蛋白酶消化法进行传代培养;用SV40慢病毒感染原代KFbs,经过嘌呤霉素筛选纯化、传代扩增,获得永生化的人KFb系。对原代KFbs及其细胞系进行染色体核型分析、短串联重复序列(STR)和性别基因检测,来鉴定细胞系身份;采用CCK-8法检测原代KFbs和细胞系增殖能力,并分别用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测其特定基因(PGK1、ENO1、LDHA、GLUT1、TGF-β1、COL1、COL3、FN)的mRNA和蛋白表达水平。原代KFbs与细胞系间相关数据比较采用t检验,P0.05)。结论成功建立了永生化的人KFbs系,其形态、表征和功能未发生明显改变,且其增殖速度较原代细胞增快。