基于环介导等温技术检测人甲流H1N1病毒的响应面优化分析

作     者：蔡文凯 郝宗杰 苏业俣 林艺平 CAI Wenkai;HAO Zongjie;SU Yeyu;LIN Yiping

作者机构：厦门医学院药学系福建厦门361000 武汉兰丁云医学检验实验室有限公司检验科湖北武汉430000 厦门市集美区疾病预防控制中心检验科福建厦门361000 

出 版 物：《中国当代医药》 (China Modern Medicine)

年 卷 期：2024年第31卷第16期

页      面：116-121页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：湖北省武汉东湖高新区“3551光谷人才计划”(N480) 

主　　题：响应面分析法 环介导等温扩增 甲流H1N1检测 即时检测 

摘      要：目的为了建立人甲型流感H1N1病毒的环介导等温扩增(LAMP)体系,本研究以H1N1病毒核酸扩增效率为指标,通过响应面分析优化探讨LAMP检测H1N1流感病毒的最佳反应条件。方法根据Box-Benhnken响应设计原理,对影响LAMP反应关键因素(甜菜碱浓度、引物浓度、反应温度)进行三因素三水平响应面法优化。同时选取60例确诊甲流临床核酸样本和60例健康受试者核酸样本,分别采用聚合酶链反应(PCR)技术和LAMP检测技术进行比对评估(评估指标包括灵敏度、特异性、准确度)。结果响应面回归模型能较好地预测LAMP检测效果与甜菜碱浓度、引物浓度和反应温度之间的关系,经过优化LAMP反应体系提高检测灵敏度和缩短反应时间。同时与PCR检测结果相比,LAMP检测实现100%的灵敏度、98.9%的特异性和99.2%的准确度,检测下限可达100 copies/ml。结论本研究建立的H1N1甲流LAMP检测是一种高效、灵敏、特异性高且不需要复杂设备的检测方法,适用于基层医疗卫生机构或居家自测,对季节性甲流病毒监测及暴发时应急检测具有重要意义。