青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白表达及纯化条件的优化

作     者：王雪薇 陈开廷 马静 刘岳青 高金亮 王翠峰 WANG Xuewei;CHEN Kaiting;MA Jing;LIU Yueqing;GAO Jinliang;WANG Cuifeng

作者机构：内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014040 内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院检验科内蒙古包头014040 鄂尔多斯市中心医院分子医学实验室内蒙古鄂尔多斯017000 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2024年第37卷第6期

页      面：751-755,762页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 0713[理学-生态学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81760375) 内蒙古自治区自然科学基金(2021MS0803) 内蒙古自治区科技创新引导项目(内财科381) 

主　　题：青海血蜱 包涵体 变性 复性 纯化 Ni-NTA亲和层析 

摘      要：目的对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化。方法将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[*** BL21(DE3)、*** Rosetta(DE3)、*** ArcticExpress(DE3)pRARE2],确定最适表达菌株后,对IPTG终浓度(0、0.5、1.0 mmol/L)、诱导温度(20、25℃)及诱导时间(0、2、4、6、8 h)进行优化。最佳诱导条件表达的菌体经高压均质破碎后,采用非变性(变性-复性-过柱)及变性(变性-过柱-复性)两种方式进行Ni-NTA亲和层析纯化。表达及纯化产物均经12%SDS-PAGE分析。结果重组Hq001蛋白最适表达菌株为感受态*** BL21(DE3);最适诱导条件为:IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间4 h。非变性纯化方式可获得相对分子质量约为18800的目的蛋白,大小与预期相符。结论采用优化的表达条件及纯化方式可获得青海血蜱唾液腺重组rHq001蛋白。