用于自然感染低龄绵羊抗体检测的禽分枝杆菌副结核亚种抗原筛选与评价

作     者：沈克飞 余远迪 付利芝 徐登峰 唐达 曹政 张素辉 SHEN Kefei;YU Yuandi;FU Lizhi;XU Dengfeng;TANG Da;CAO Zheng;ZHANG Suhui

作者机构：重庆市畜牧科学院重庆402460 重庆市兽用生物制品工程技术研究中心重庆402460 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2024年第37卷第6期

页      面：679-686页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：重庆市科研机构绩效激励引导专项(cstc2019jxjl80016) 重庆荣昌农牧高新技术产业研发专项(cstc2020ngzx20211) 

主　　题：禽分枝杆菌副结核亚种 抗原 血清反应性 副结核 反刍动物 

摘      要：目的分析禽分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis,MAP)10个血清反应性抗原(MAP1138c、MAP2121c、MAP0150c、MAP0862、MAP0209c、MAP2120c、MAP0038、MAP3420c、MAP 2154c和MAP-2751)在自然感染低月龄绵羊体内的抗体反应,评估其诊断价值。方法采集有副结核(paratuberculosis,PTB)病史羊群中无明显PTB症状的6月龄绵羊血清和肛拭子样品,采用PTB抗体检测ELISA试剂盒检测血清,基于MAP F57元件的荧光定量PCR检测肛拭子,根据检测结果对羊只进行分组。采用PCR检测阳性肛拭子中的MAP 10个抗原基因。将抗原基因克隆至pET-28a载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,Ni-Sepharose纯化重组抗原。将纯化的重组抗原包被ELISA板,用于检测采集的血清,以分析所选抗原在自然感染绵羊体内的抗体反应。分析不同抗原血清抗体的检出率,以评估其诊断价值。结果所采样的72只绵羊被分为肛拭子阳性-抗体阳性(34只)、肛拭子阳性-抗体阴性(23只)、肛拭子阴性-抗体阴性(15只)3组。10个抗原基因均能在阳性肛拭子中检测到,且每个基因序列高度一致。经ELISA检测,MAP1138c、MAP2121c、MAP0150c、MAP0862在感染绵羊体内产生了抗体反应。在57只感染羊中,分别有30、34、24和31只检测到针对MAP1138c、MAP2121c、MAP0150c和MAP0862的抗体。在肛拭子阳性-抗体阳性组中,抗MAP1138c的抗体检出率(76.47%)最高;在肛拭子阳性-抗体阴性组中,抗MAP2121和MAP0862的抗体检出率(52.17%和47.83%)高于其他2种蛋白。在72份血清样品的检测中,包被MAP2121c和MAP0862的ELISA检测结果的符合率超过91%。结论MAP1138c、MAP2121c和MAP0862可能是诱导自然感染低龄绵羊产生MAP抗体反应的显性生物标志物,MAP2121c和MAP0862可弥补商品化ELISA试剂盒在PTB早期诊断上敏感性不足的缺陷。