加味桃核承气汤对db/db小鼠胰腺线粒体自噬的调控作用

作     者：许强 顾嘉琪 张萌 韦永政 朱章志 

作者机构：广西中医药大学广西南宁530001 广州中医药大学第一附属医院广东广州510000 

出 版 物：《时珍国医国药》 (Lishizhen Medicine and Materia Medica Research)

年 卷 期：2024年第35卷第4期

页      面：818-822页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金(82174284) 广西中医药大学2020年引进博士科研启动基金项目(2020BS018) 桂派中医药师承教育项目。 

主　　题：加味桃核承气汤 糖尿病 线粒体自噬 PINK1 Parkin 

摘      要：目的探讨加味桃核承气汤对db/db小鼠糖代谢水平的影响,并进一步研究其对db/db小鼠胰腺线粒体自噬的调控作用,为加味桃核承气汤的临床使用提供实验证据。方法SPF级7~8周龄雄性db/db小鼠及同周龄雄性同窝db/m小鼠分别为40只和10只。所有小鼠进行适应性喂养1周之后,db/db小鼠尾尖随机血糖16.7mmol/L,并伴有摄食量增加、饮水量增加,则可判断DM模型成立,转入IVC笼内饲养。使用随机抽样的方法,将db/db小鼠分为加味桃核承气汤高剂量组(2.64g·kg^(-1))、雷帕霉素组(1mg·kg^(-1))、加味桃核承气汤低剂量组(1.32g·kg^(-1))及模型组。将dm/m小鼠设为正常组。各组给药干预8周后,观察小鼠的一般状态、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)等情况,采用免疫组化法检测小鼠胰腺中PINK1和Parkin的染色情况;ELISA法检测小鼠血清中糖化血红蛋白(glycohemoglobin,Ghb)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS),并计算胰岛素抵抗指数。使用透射电镜检测观察小鼠胰腺组织胰岛的结构及形态、线粒体、自噬体的数量。采用Western Blot技术,检测小鼠鼠胰腺中PINK1和Parkin的蛋白表达。结果各组干预8周后,与正常组比较,模型组FBG、Ghb、FINS及胰岛素抵抗指数显著增加(P0.05或P0.01);与模型组比较,加味桃核承气汤各剂量组FBG、Ghb、FINS及胰岛素抵抗指数显著降低(P0.05或P0.01)。通过电镜观察发现,正常组线粒体的数量相对比较多,胞内各细胞器结构清晰,其中部分线粒体肿胀、甚至出现空泡、脊断裂或消失,有小部分线粒体周围出现空泡状双层膜样结构,并形成双层膜包裹的典型自噬体。模型组的小鼠胰腺中线粒体数量相对不足,极少能观察到自噬小体,并且细胞内结构欠清晰。与模型组比较,加味桃核承气汤各组中线粒体出现空泡、肿胀的数量增加。免疫组化法结果显示,与模型组相比,正常组小鼠的胰腺组织中Parkin和PINK1蛋白表达明显增加,着色深,呈黄褐色,表达呈现出强阳性,使用加味桃核承气汤干预之后,Parkin和PINK1蛋白的表达强度增强。WB结果显示,与模型组相比,正常组、加味桃核承气汤高剂量组小鼠胰腺的PINK1和Parkin蛋白表达均明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加味桃核承气汤够改善db/db小鼠的一般状态,降低小鼠的FBG、Ghb、FINS及胰岛素抵抗指数,调节胰腺线粒体自噬,进而发挥降糖作用,其机制可能是通过激活调控小鼠胰腺线粒体自噬来实现。