枯草芽孢杆菌高效分泌表达盒的构建和应用

作     者：韩瑞 初文琴 刘振 HAN Rui;CHU Wenqin;LIU Zhen

作者机构：中国海洋大学食品科学与工程学院海洋食品加工与安全控制国家重点实验室山东青岛266404 青岛市食品生物技术重点实验室山东青岛266404 中国轻工业水产品生物加工重点实验室山东青岛266404 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2024年第50卷第11期

页      面：9-17页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 081703[工学-生物化工] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32172178) 

主　　题：枯草芽孢杆菌 分泌 启动子 核糖体结合位点 信号肽 壳聚糖酶 

摘      要：该工作旨在研究枯草芽孢杆菌表达系统中不同元件之间的适配性,从而构建高效蛋白分泌载体,并进一步应用于提高壳聚糖酶Csn21c的胞外表达量。首先,构建包含不同启动子(P43、P_(shuttle09))、核糖体结合位点(RBS1、RBS5)和信号肽(Snpr B、Spho D、Symz C)的12个质粒,并以分别以3种蛋白(琼胶酶Ag WH50C、壳聚糖酶Csn21c和脂肪酶Lip15)为指示蛋白比较不同元件组合的蛋白分泌水平,发现载体p P435Y*K(P43-RBS5-Symz C)和p P095P*K(P_(shuttle09)-RBS5-Spho D)优于其他载体。相较原载体(p P431N*K),载体p P435Y*K能使琼胶酶Ag WH50C酶活性提高184.25%,脂肪酶Lip15酶活性提高52.8%,壳聚糖酶Csn21c酶活性提高164.62%。最后,通过比较5种不同培养基,确定了TB培养基为壳聚糖酶Csn21c的最适发酵培养基,使用TB培养基壳聚糖酶Csn21c的最高酶活力达到21.14 U/m L,较LB培养基的酶活力提高了128.31%。