IS200/IS605转座子家族编码的核酸酶OgeuIscB基因编辑体系的优化

作     者：顾秋茜 王无可 张军 GU Qiuxi;WANG Wuke;ZHANG Jun

作者机构：南京医科大学生殖医学与子代健康全国重点实验室南京211166 浙江省之江实验室杭州311121 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2024年第42卷第5期

页      面：370-376,383页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2022YFC2702705) 

主　　题：基因编辑 核酸内切酶 IS200/IS605转座子 蛋白质工程 

摘      要：目的提升来源于IS200/IS605转座子家族的RNA引导的核酸内切酶OgeuIscB的基因编辑效率。方法利用OgeuIscB蛋白已解析的晶体结构,计算氨基酸与核酸之间的原子距离,将距离小于10的非正电荷氨基酸残基突变为精氨酸(arginine,R)以提高OgeuIscB与核酸的亲和力,通过人胚肾293T细胞内源性位点验证不同突变体的基因编辑效率。结果经过两轮迭代突变,发现Q376R-S456R和A401R-S456R这2个双突变体在不同细胞系的多个内源性位点上均能显著提升OgeuIscB的基因编辑效率。结论基于结构对OgeuIscB蛋白进行理性蛋白质工程化改造,能够提升OgeuIscB核酸内切酶活性,为将其作为一种有效的基因编辑工具提供了实验依据。