LncRNA PVT1靶向miR-146a对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞TLR4通路免疫效应的影响

作     者：孙沛 姜振伟 

作者机构：武汉市普仁医院检验科湖北武汉430080 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2024年第44卷第12期

页      面：3029-3034页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主　　题：长链非编码核糖核酸浆细胞瘤可变异位基因LncRNA(PVT)1 微小核糖核酸-146a Toll样受体4 免疫效应 

摘      要：目的探讨长链非编码核糖核酸浆细胞瘤可变异位基因(LncRNA PVT)1靶向微小核糖核酸(miR)-146a对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞Toll样受体(TLR)4通路免疫效应的影响。方法采用结核分枝杆菌株H37Rv感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分别向感染细胞转染LncRNA PVT1干扰阴性对照(si-NC)、si-LncRNA PVT1、miR-146a模拟物(miR-146a mimics)、miR-146a mimics阴性对照(miR-NC)、si-LncRNA PVT1+miR-146a抑制剂阴性对照(NC inhibitor)、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor,记为si-NC组、si-LncRNA PVT1组、miR-146a mimcs组、miR-NC组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组,另取未转染的感染细胞为对照组。转染48 h后,倒置荧光显微镜观测转染效率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞LncRNA PVT1和miR-146a、TLR4、髓样分化因子(MyD88)、核转录因子(NF)-κB p65 mRNA表达;Western印迹检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因及RT-qPCR法检测LncRNA PVT1与miR-146a、miR-146a与TLR4的靶向作用。结果si-NC组、si-LncRNA PVT1组、miR-146a mimcs组、miR-NC组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组转染效率(81.21±4.15)%、(85.68±3.49)%、(86.55±5.03)%、(84.63±4.29)%、(83.41±4.73)%、(80.67±3.95)%;与对照组、si-NC组、miR-NC组比较,miR-146a mimics组、si-LncRNA PVT1组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组和si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组TNF-α和IL-6水平显著下降,miR-146a表达显著上升,TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达和p-NF-κB p65蛋白表达显著下降(P0.01);与si-LncRNA PVT1组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组比较,si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组TNF-α和IL-6水平上升,TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达和p-NF-κB p65蛋白表达上升,差异有统计学意义(P0.01);LncRNA PVT1直接靶向调控miR-146a;miR-146a直接靶向调控TLR4。结论抑制LncRNA PVT1可促进结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞的免疫效应,可能与靶向miR-146a抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路、下调TNF-α和IL-6水平相关。