玉米大斑病菌cDNA文库的构建及转录因子StMR1互作蛋白的筛选

作     者：王秋月 段鹏亮 李海笑 刘宁 曹志艳 董金皋 WANG Qiu-yue;DUAN Peng-liang;LI Hai-xiao;LIU Ning;CAO Zhi-yan;DONG Jin-gao

作者机构：河北农业大学植物保护学院保定071000 华北作物改良与调控国家重点实验室保定071000 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第6期

页      面：281-289页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32072370) 河北省自然科学基金项目(C2021204136) 国家现代农业产业技术体系(CARS-02) 

主　　题：玉米大斑病菌 cDNA文库 转录因子 酵母双杂交 互作蛋白 

摘      要：【目的】筛选玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)转录因子的互作蛋白,解析黑色素调控转录因子StMR1调控玉米大斑病菌致病性的分子机制。为解析玉米大斑病菌侵染过程中转录因子的调控网络,阐明病菌的致病机理提供参考。【方法】收集玉米大斑病菌菌丝和孢子不同萌发阶段作为试验材料,采用Gateway方法构建玉米大斑病菌cDNA文库,使用同源重组的方法构建转录因子StMR1的诱饵载体,采用酵母双杂交技术筛选其互作蛋白并进行一对一验证。【结果】构建的玉米大斑病菌文库插入的平均片段长度大于1000 bp,初级文库及次级文库的库容量为1.2×107和1.04×107CFU,重组率为100%,可以用于酵母双杂交筛选。成功构建可以用于筛库的诱饵载体pGBKT7-StMR1,经初筛与复筛得到3个互作蛋白,一对一验证短链脱氢酶、糖基转移酶、富含亮氨酸重复序列蛋白均与转录因子StMR1存在互作。【结论】成功构建了丰富度高且质量好的玉米大斑病菌cDNA文库并筛选到了与转录因子StMR1互作的蛋白。