枸杞多糖对Hcy诱导的小鼠肝细胞损伤的保护作用及其机制

作     者：王佩佩 岳云 曹丽翠 李宏伟 刘丽 李航鹰 王晓丽 Wang Pei-Pei;Yue Yun;Cao Li-Cui;Li Hong-Wei;Liu Li;Li Hang-Ying;Wang Xiao-Li

作者机构：银川市第一人民医院中医科宁夏银川750004 中卫市中医院针灸科宁夏中卫755000 宁夏回族自治区人民医院中医科宁夏银川750004 宁夏医科大学药学院宁夏银川750004 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2024年第49卷第5期

页      面：542-549页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(222607017) 

主　　题：枸杞多糖 同型半胱氨酸 肝细胞损伤 DNA甲基化 

摘      要：目的探讨枸杞多糖(LBP)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的小鼠肝细胞损伤的作用及其机制。方法体外培养正常C3H/An小鼠肝细胞(NCTC 1469),采用不同浓度的Hcy(0、50、100、200、500μmol/L)处理NCTC 1469细胞,使用MTT法检测不同浓度Hcy对细胞活性的影响。取对数生长期细胞,设置:(1)对照组(采用10%马血清的DMEM培养基培养)与Hcy组(采用100μmol/L Hcy溶液处理48 h),收集细胞。采用细胞活力染色检测细胞凋亡情况,谷草转氨酶(AST)/谷丙转氨酶(ALT)活性检测试剂盒检测AST、ALT活性,RT-qPCR检测YAP1(Yes相关蛋白1)、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRAN的表达,Western blotting检测YAP1蛋白的表达,巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测YAP1启动子区DNA甲基化率。(2)对照组、LBP组、Hcy组与Hcy+LBP组,LBP组采用4 mg/ml LBP溶液处理2 h,Hcy组、Hcy+LBP采用100μmol/L Hcy溶液处理48 h,46 h时Hcy+LBP组加入4 mg/ml LBP溶液处理,收集细胞。采用RT-qPCR检测YAP1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRAN的表达,Western blotting检测YAP1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,AST/ALT活性检测试剂盒检测AST、ALT活性。采用生物信息学方法预测YAP1启动子区DNA甲基化CpG岛。结果根据MTT法检测结果,选择100μmol/L Hcy处理NCTC 1469细胞进行后续实验。与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率增高(P0.01),ALT、AST活性增高(P0.001),YAP1 mRAN和蛋白相对表达水平降低(P0.001),YAP1启动子区域甲基化率增高(P0.01),DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a及DNMT3b mRNA相对表达水平增高(P0.01或P0.001)。与Hcy组比较,Hcy+LBP组DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a及DNMT3b mRNA相对表达水平降低(P0.001),YAP1 mRAN和蛋白相对表达水平明显增高(P0.01或P0.001),Bcl-2蛋白相对表达水平明显升高(P0.001),Bax蛋白相对表达水平明显降低(P0.001),ALT、AST活性降低(P0.001)。结论YAP1表达降低可能是Hcy诱导的小鼠NCTC 1469细胞损伤的关键过程,YAP1启动子区域甲基化的改变可能是Hcy引起YAP1表达变化的分子机制。LBP可能通过正向调节YAP1的表达改善Hcy引起的小鼠NCTC 1469细胞损伤。