牙鲆基因组（CAG）_n微卫星DNA特征分析

作     者：王蕾 刘继红 张立冬 孙效文 WANG Lei;LIU Ji-hong;ZHANG Li-dong;SUN Xiao-wen

作者机构：大连水产学院生命科学与技术学院 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 

出 版 物：《中国水产科学》 (Journal of Fishery Sciences of China)

年 卷 期：2009年第16卷第6期

页      面：807-815页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家科技基础条件平台建设资助项目(2005DKA30470-005) 

主　　题：牙鲆 微卫星 磁珠富集 

摘      要：通过磁珠富集法筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus)的微卫星分子标记,采用限制性内切酶Sau3A I对牙鲆完整基因组DNA进行酶切;通过蔗糖溶液梯度离心,收集400～900bp大小的片段,连接Brown接头,构建牙鲆基因组文库。用生物素标记的微卫星探针(CAG)15对基因组文库进行杂交,利用磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列,并对其进行PCR扩增;将扩增产物连接到pMD18-T载体后转入感受态大肠杆菌DH5α中,得到微卫星序列文库。利用大量质粒检测法进行二次筛选,成功地从牙鲆基因组中分离出含有CAG重复的微卫星序列,测序其中的3000个单菌落,获得2805个(占93.5%)含有微卫星序列的克隆,其中含有微卫星座位3120个,完美型1808个,占57.97%;非完美型226个,占7.25%;混合型1085个,占34.78%。从中选出186个微卫星序列设计120对引物并合成,经过筛选,74对引物可扩增清晰条带,其中68对呈多态性。