重组抗黑猩猩腺病毒68型单克隆抗体制备及应用研究

作     者：赵萍 吴月 何佩 赵瑾 唐瑞琪 Zhao Ping;Wu Yue;He Pei;Zhao Jin;Tang Ruiqi

作者机构：武汉博沃生物科技有限公司检验开发部武汉430075 

出 版 物：《国际生物制品学杂志》 (International Journal of Biologicals)

年 卷 期：2024年第47卷第2期

页      面：72-78页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：2019武汉市科技计划项目(2019030703011510) 

主　　题：黑猩猩腺病毒68型 六邻体 抗体/单克隆 病毒滴定 

摘      要：目的制备1株抗黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)六邻体(hexon,hex)蛋白重组单克隆抗体(单抗)。方法表达并纯化AdC68-hex蛋白,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA及细胞免疫染色法筛选得到1株分泌抗AdC68-hex蛋白单抗的杂交瘤细胞。抽提杂交瘤细胞RNA进行测序,获得单抗重链与轻链可变区序列,分别与小鼠重链与轻链恒定区序列拼接得到小鼠全长IgG1κ抗体重链与轻链,并构建至真核细胞高效表达质粒。将重链与轻链质粒共同转染至哺乳动物细胞表达并纯化得到抗AdC68-hex重组单抗。将抗体用于滴定AdC68、重组AdC68及AdC68重组疫苗,并开展方法学验证。结果表达制备的AdC68-hex蛋白能有效诱导小鼠的病毒产生抗AdC68-hex抗体。抗AdC68-hex重组单抗用于重组AdC68滴定具备良好的专属性、耐用性,在4.56~9.57 lg感染单位/ml范围内具备良好的线性、准确度和精密度。结论制备的重组抗AdC68-hex单抗适用于AdC68及AdC68重组疫苗载体相关的基因治疗药物及疫苗等的检测。