p62体募集自噬相关蛋白WIPI2的机制研究

作     者：张金佩 冯学召 刘梦薇 何心瞳 徐梦波 阿来依·买提卡比力 麦尔哈巴·达毛拉 衡锐 米娜 ZHANG Jinpei;FENG Xuezhao;LIU Mengwei;HE Xintong;XU Mengbo;Alaiyi Maitikabili;Maierhaba Damaola;HENG Rui;MI Na

作者机构：新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学重点实验室乌鲁木齐830017 中山大学肿瘤防治中心广东510060 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830054 

出 版 物：《新疆医科大学学报》 (Journal of Xinjiang Medical University)

年 卷 期：2024年第47卷第5期

页      面：668-674页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：新疆维吾尔自治区青年基金项目(2021D01C272) 省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题资助项目(SKL-HIDCA-2023-5) 

主　　题：自噬体 自噬接头蛋白 WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2 

摘      要：目的探讨自噬接头蛋白(Sequestosome 1,SQSTM1/p62)与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)复合物的结合蛋白WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2(WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 2,WIPI2)在空间上定位的调控关系。方法使用CRISPR-Cas9技术敲除正常大鼠肾上皮细胞(Normal rat kidney,NRK)中的自噬相关基因2A(Autophagy-related gene,Atg2A)、自噬相关基因2B(Autophagy-related gene,Atg2B)和p62基因,建立Atg2A和Atg2B基因敲除的细胞系(Atg2AB double knockout,Atg2AB DKO)以及p62基因敲除细胞系(p62 knockout,p62 KO);透射电镜观察Atg2AB DKO细胞中p62体周围囊泡的定位;活细胞成像观察Atg2AB DKO细胞内p62体与自噬相关蛋白WIPI2的定位变化;光漂白实验观察相变蛋白p62与WIPI2的荧光漂白恢复;通过免疫荧光观察WT、p62 KO和Atg2AB DKO细胞中WIPI2与p62的定位关系;通过蛋白免疫印记检测WT和p62 KO细胞中WIPI2表达量的变化。结果建立了Atg2AB DKO和p62 KO细胞系;透射电镜显示Atg2AB DKO细胞中p62附近聚集了大量囊泡;在Atg2AB DKO中,通过活细胞成像观察到tdTomatop62与WIPI2-GFP高度共定位;荧光漂白实验观察到WIPI2具有流动性;通过免疫荧光观察到,与WT细胞相比,在Atg2AB DKO中WIPI2点的数量明显增多(P0.05)。结论无膜细胞器p62能够与具有流动性的WIPI2阳性囊泡动态融合,促进自噬体的形成。