构建治疗非酒精性脂肪性肝病的TREM2慢病毒载体

作     者：魏莉 邵思佳 芶恺琳 高春辰 秦鸿雁 WEI Li;SHAO Sijia;GOU Kailin;GAO Chunchen;QIN Hongyan

作者机构：空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032 

出 版 物：《空军军医大学学报》 (Journal of Air Force Medical University)

年 卷 期：2024年第45卷第6期

页      面：609-616页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82230015,31970829) 陕西省创新能力支撑计划项目(2021TD-36) 

主　　题：非酒精性脂肪性肝病 AML12肝细胞 TREM2 细胞凋亡 

摘      要：目的构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对AML12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染AML12肝细胞系,利用qRT-PCR技术、Western blotting技术、流式细胞术检测转染效率,利用免疫荧光染色技术检测TREM2或sTREM2的表达和细胞定位;利用流式细胞术检测TREM2或sTREM2对体外NAFLD条件下细胞凋亡的影响和对静息态下细胞周期的影响;利用油红O染色观察脂质沉积变化情况。结果与对照组相比,稳定转染细胞系中TREM2和sTREM2 mRNA水平明显升高,蛋白表达量明显升高,提示成功建立稳定转染细胞系。在体外NAFLD条件下,过表达TREM2可减轻AML12肝细胞的凋亡和脂质沉积(P0.05)。静息态下,过表达TREM2或sTREM2均使得G1期细胞数目比例减少(P0.05),S期细胞数目比例增多(P0.01),而体外NAFLD条件均使得S期细胞数目比例减少(P0.01),G2期细胞数目比例增多(P0.01)。结论肝细胞中TREM2的过表达可减少肝细胞凋亡和脂质沉积,进而保护肝细胞在NAFLD条件下免受损伤。