紫花苜蓿不同组织及不同激素处理下内参基因的筛选

作     者：岳炜楠 胥通玉 苗佳敏 李玉珠 

作者机构：甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室甘肃省草业工程实验室中-美草地畜牧业可持续发展研究中心 

出 版 物：《草原与草坪》 (Grassland and Turf)

年 卷 期：2024年

学科分类：090503[农学-草业科学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：甘肃农业大学科技创新基金（青年导师扶持基金）（GAU-QDFC-2021-02） 国家自然科学基金（31760701） 甘肃农业大学公招博士科研启动基金（GAU-KYQD-2017-05） 

主　　题：紫花苜蓿 实时荧光定量PCR 内参基因 组织 激素 

摘      要：【目的】筛选‘新疆大叶’紫花苜蓿在不同组织及不同激素处理下的最佳内参基因。【方法】本试验以Actin、GAPDH、TUB、EF-1α、CYP、MPK4和TCTP作为候选内参基因，通过qRT-PCR及GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件对‘新疆大叶’紫花苜蓿不同组织及不同激素处理下的样品进行内参基因表达稳定性分析，并对筛选出的最佳内参基因进行表达稳定性验证。【结果】GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件对根、茎、叶、花蕾、花和绿荚这6个组织的内参基因表达稳定性进行综合分析，显示稳定性最高的内参基因分别为EF-1α/GAPDH、EF-1α和Actin，3个软件对MEJA、NAA、ABA、GA3、SA和ETH这6种激素处理后叶片中内参基因表达稳定性的综合分析，均显示Actin基因的稳定性最高；RefFinder软件对上述3个软件的结果进行综合分析，显示不同组织中稳定性最好的内参基因是EF-1α，6种激素处理下，稳定性最好的内参基因是Actin；选用最稳定和最不稳定的内参基因对花期调控基因MsCOL2在不同组织中和SA诱导下的qRT-PCR结果进行分析，结果显示相比于稳定内参基因，不稳定内参基因的校正会使得MsCOL2基因的表达呈现出明显变化。【结论】‘新疆大叶’紫花苜蓿在不同组织中的最佳内参基因为EF-1α，在不同激素处理下叶片中的最佳内参基因为Actin。