一种小鼠原代肝细胞的分离与培养方法

作     者：肖勋立 黄聪聪 武利雪 胡慧怡 何学珍 胡立业 喻理德 XIAO Xun-li;HUANG Cong-cong;WU Li-xue;HU Hui-yi;HE Xue-zhen;HU Li-ye;YU Li-de

作者机构：井冈山大学附属医院药剂科江西吉安343000 江西中医药大学药学院江西南昌330004 

出 版 物：《宜春学院学报》 (Journal of Yichun University)

年 卷 期：2024年第46卷第3期

页      面：45-48,56页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：江西省中医药科研基金基础类研究项目(编号:2019A332) 江西省卫生健康委科技计划(编号:20203788) 江西省大学生创新创业项目(编号:S202310412088) 

主　　题：原代小鼠肝细胞 两步灌流分离法 体外培养 

摘      要：目的:探索一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离方法,并延长其体外培养的时间。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠,以含双抗的D-Hanks灌流液经肝门静脉充分灌注肝脏,然后以0.2 mg/mL的Ⅳ型胶原酶灌注消化,接着过滤、离心、洗涤,获得小鼠原代肝细胞。通过台盼蓝染色检验小鼠原代肝细胞活率,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态变化,糖原染色鉴定细胞纯度,添加ITS-X和HGF细胞因子延长小鼠原代肝细胞的体外培养时间。结果:平均每只成年小鼠肝脏可提取获得原代肝细胞约2×107个,台盼蓝染色显示细胞活率均超过95%,糖原染色结果表明此方法获得的原代肝细胞纯度高于95%,通过添加HGF和ITS-X两种细胞因子能够有效地延长肝细胞形态的体外维持时间。结论:本实验在原有小鼠原代肝细胞两步灌流分离法和培养的基础上,经过优化,成功建立了一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离和培养方法,为肝脏的体外研究提供了技术保障。