天麻钩藤饮对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞氧化应激中PINK1/Parkin通路的影响

作     者：时拥月 符雁榕 秦钦 陈雨丝 姚佳梅 钟广伟 

作者机构：中南大学湘雅医院老年医学科 湖南师范大学医学院 中南大学湘雅医院国际医疗部 中南大学湘雅医院国家老年疾病临床医学研究中心 

出 版 物：《中国中药杂志》 (China Journal of Chinese Materia Medica)

年 卷 期：2024年第14期

页      面：3894-3900页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81673858) 湖南省自然科学基金项目(2023JJ30979) 湖南省中医药科研计划项目(C2022032) 湖南省生态环境科研项目(HBKYXM-2023017) 

主　　题：天麻钩藤饮 血管平滑肌细胞 氧化应激 线粒体自噬 PINK1/Parkin通路 

摘      要：探讨天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）氧化应激的影响及其分子机制。采用组织贴块法进行原代大鼠血管平滑肌细胞培养，α-actin免疫细胞荧光法鉴定VSMC,AngⅡ1×10-6mol·L-1作为刺激因子，天麻钩藤饮灌胃Sprague Dawley（SD）大鼠制备药物血清；将大鼠VSMC分为正常组、模型组、中药组和抑制剂（3-甲基腺嘌呤，3-MA）组；cell counting kit-8（CKK-8）法检测细胞增殖活性，溴脱氧尿苷（BrdU）流式细胞仪检测细胞周期，Transwell实验检测细胞迁移能力；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测VSMC中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）的活性；采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）荧光强度；采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测VSMC中PTEN诱导假定激酶1（PTEN-induced putative kinase 1,PINK1）、帕金蛋白（Parkin）、p62及轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）蛋白表达。结果显示，天麻钩藤饮含药血清在8%质量分数下干预48 h后可显著抑制VSMC生长；与正常组比较，模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加，SOD、CAT含量显著降低，MDA含量显著升高，ROS荧光强度显著增强，PINK1、Parkin及LC3-Ⅱ蛋白表达显著下降，p62蛋白表达显著升高。与模型组比较，中药组VSMC增殖活性及迁移数量均明显降低，SOD、CAT含量显著增加，MDA含量显著下降，ROS荧光强度显著减弱，PINK1、Parkin及LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高，p62蛋白表达显著下降。与中药组比较，加入线粒体自噬抑制剂3-MA可阻断天麻钩藤饮含药血清干预VSMC增殖迁移、线粒体自噬及氧化应激水平，差异具有统计学意义。综上所述，天麻钩藤饮具有良好的抗氧化活性，可抑制细胞增殖和迁移，其作用机制可能与激活线粒体自噬PINK1/Parkin信号通路有关。