鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增(RAA)检测方法的建立及应用

作     者：陈曦 杨金先 葛均青 CHEN Xi;YANG Jinxian;GE Junqing

作者机构：福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 

出 版 物：《大连海洋大学学报》 (Journal of Dalian Ocean University)

年 卷 期：2024年第39卷第2期

页      面：234-240页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：福建省公益类科研院所基本科研业务专项(2021R1027007,2023R1081) 福建省农业科学院“5511”协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013) 

主　　题：鳗鲡疱疹病毒(AngHV) 实时荧光RAA 快速检测 

摘      要：为建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)的实时荧光重组酶辅助扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法,根据AngHV的ORF 95基因序列设计引物和探针,优化反应温度,确定反应时间,并应用该方法对采集的临床样品进行检测。结果表明:本研究中建立的实时荧光RAA检测方法的最佳反应温度为39℃,反应时间为20 min;实时荧光RAA检测方法的灵敏度、特异性及重复性评价显示,RAA检测AngHV的最低检测量为1×10^(2)copies/μL,可特异性地检测AngHV,与美洲鳗鲡腺瘤病毒(American eel adomavirus,AEAdoV)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus,RGV)、鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)和对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)均无交叉反应;实时荧光RAA检测方法的组内和组间变异系数均小于5%,表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好;应用该方法对采集的25份临床样品进行检测显示,实时荧光RAA检测方法与qPCR方法的检出率一致,均为92%,高于普通PCR的检出率(76%)。研究表明,本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增RAA检测方法快速、灵敏、可靠、准确,可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。