一种新型豚鼠反流性食管炎模型的构建

作     者：次仁玉珍 吴静 查兰兰 余晓云 沈磊 Ciren Yuzhen;Wu Jing;Zha Lanlan;Yu Xiaoyun;Shen Lei

作者机构：武汉大学人民医院消化内科武汉430060 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科武汉430022 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2024年第41卷第3期

页      面：622-626页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81570490 82070555) 

主　　题：反流性食管炎 自发性饮酸 豚鼠 动物模型 

摘      要：目的探讨不同天数饮用含胃蛋白酶的盐酸(PH=3)的豚鼠建立反流性食管炎模型的效果,并确定最佳天数的新型建模方法。方法将40只3~4周龄的SD雄性豚鼠采用随机数字表法分为对照组、14 d模型组、21 d模型组、28 d模型组、35 d模型组,每组各8只。适应性饲养7 d后开始造模,其中对照组予以饮用无菌水,500 ml/d,连续28 d。模型组予以饮用含0.5%胃蛋白酶的0.1 mol/L盐酸(HCl),PH=3500ml/d,分别连续14、21、28、35 d。每天观察各组豚鼠的一般状况、体重变化。取材后记录食管组织肉眼状态,行苏木精-伊红(HE)染色组织病理学观察。各组豚鼠食管组织通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量。同时蛋白质印迹法(Western blot)检测ZO-1、Occludin的蛋白表达。两组间比较采用t检验。结果相较于对照组,各模型组的豚鼠活动力下降、体重增长缓慢,部分出现腹泻及皮疹。大体形态观察可见各模型组豚鼠的食管组织不同程度的黏膜充血,未见明显糜烂灶。光镜下可见各模型组食管黏膜出现不同程度早期炎症损伤,28 d模型组和35 d模型组可见明显的食管黏膜增厚、炎性细胞浸润、鳞状上皮细胞过度增生、固有层乳头延长等食管炎的表现。随着造模时间的延长,模型组豚鼠食管组织中炎性因子表达增加、黏膜屏障功能受损。从Western blot结果可见,21d、28、35 d模型组的连接蛋白ZO-1的蛋白表达水平均低于对照组(0.612±0.051比1.000±0.157、0.508±0.068比1.000±0.157、0.514±0.094比1.000±0.157,t=4.076、4.979、4.597,P0.05)。14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组(0.758±0.120比1.000±0.089、0.725±0.093比1.000±0.089、0.444±0.054比1.000±0.089、0.443±0.099比1.000±0.089,t=2.802、3.699、9.259、7.239,P0.05)。从RT-PCR结果可见,28、35 d模型组的连接蛋白ZO-1的mRNA表达水平均低于对照组(0.115±0.066比1.208±0.796、0.130±0.038比1.208±0.796,t=4.105、4.056,P0.05)。14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组(0.679±0.148比0.978±0.098、0.551±0.227比0.978±0.098、0.242±0.167比0.978±0.098、0.126±0.103比0.978±0.098,t=4.837、4.884、11.196、16.894,P0.05)。28、35 d模型组中炎性因子IL-6的mRNA表达水平均高于对照组(10.985±5.300比1.033±0.284、17.192±11.321比1.033±0.284,t=-5.625、-4.281,P0.05)。28、35 d模型组中炎性因子TNF-α的mRNA表达水平均高于对照组(7.565±2.729比1.014±0.182、13.190±5.530比1.014±0.182,t=-5.449、-4.920,P0.05)。14、21、28、35 d模型组的抗炎因子IL-10的mRNA表达水平均低于对照组(0.486±0.273比1.010±0.150、0.309±0.206比1.010±0.150、0.190±0.171比1.010±0.150、0.215±0.126比1.010±0.150,t=5.043、8.253、10.822、12.203,P0.05)。结论通过豚鼠自发性饮酸可以成功建立反流性食管炎模型,并且28 d造模时间是最佳的选择,为后续研究奠定基础。